發(fā)布時間：2022-11-01 17:50

　　目的研究新狼毒素A（Neochamae jasmin A,NCA）在體外對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞糖代謝及遷移的影響。方法采用黃酰羅丹明B（SRB）法檢測NCA對細(xì)胞增殖的影響;采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測NCA對細(xì)胞遷移的影響;利用試劑盒檢測NCA對B16F10細(xì)胞中乳酸（LD）水平、葡萄糖攝取量和ATP含量的改變及對己糖激酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）和乳酸脫氫酶（LDH）活性的影響;利用RT-PCR法檢測糖酵解及遷移相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果 NCA顯著抑制小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞增殖和細(xì)胞劃痕愈合,下調(diào)MMP-2和MMP-9 mRNA的表達(dá),上調(diào)TIMP-1、TIMP-2mRNA的表達(dá);下調(diào)GLUT1、PKM2、LDHA mRNA的表達(dá),濃度依賴性的抑制ATP的產(chǎn)生和乳酸的釋放,減少葡萄糖的攝取,降低糖酵解關(guān)鍵酶HK、PK、LDH的活性。結(jié)論推測NCA抑制B16F10細(xì)胞增殖和遷移可能與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞糖酵解有一定相關(guān)性。 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞系
        1.1.2 藥品與試劑
        1.1.3 儀器
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及儲備液配置
    1.3 細(xì)胞活力測定
    1.4 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
    1.5 B16F10細(xì)胞中ATP含量測定
    1.6 細(xì)胞乳酸(LD)含量測定
    1.7 細(xì)胞培養(yǎng)液中葡萄糖(GOD)含量測定
    1.8 丙酮酸激酶(PK)的活性測定
    1.9 己糖激酶(HK)的活性測定
    1.1 0 乳酸脫氫酶(LDH)的活性測定
    1.11 GLUT1、LDHA、PKM2、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的mRNA表達(dá)的測定
    1.1 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 NCA抑制B16F10細(xì)胞增殖
    2.2 NCA抑制B16F10細(xì)胞遷移
    2.3 NCA抑制B16F10細(xì)胞ATP的生成
    2.4 NCA減少B16F10細(xì)胞乳酸生成
    2.5 NCA減少B16F10細(xì)胞葡萄糖的攝取
    2.6 NCA抑制己糖激酶(HK)，丙酮酸激酶(PK)和乳酸脫氫酶(LDH)的活力
    2.7 NCA下調(diào)GLUT1、LDHA、PKM和MMP-2、MMP-9的表達(dá)，上調(diào)TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表達(dá)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]瑞香狼毒石油醚提取物化學(xué)成分及抗癌活性研究[D]. 張世鋒.西北大學(xué) 2017
[2]巖大戟內(nèi)酯B對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞糖酵解及凋亡的影響[D]. 高彩霞.濱州醫(yī)學(xué)院 2017



本文編號：3699829