發(fā)布時(shí)間：2017-05-15 23:14

  本文關(guān)鍵詞：高產(chǎn)角鯊烯類(lèi)酵母Pseudozyma sp.SD 301的篩選、鑒定及發(fā)酵條件的優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：角鯊烯是重要的化學(xué)活性物質(zhì),因其具有抗腫瘤、緩衰老、抗病毒等多種生理功能而被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域。但是角鯊烯昂貴的價(jià)格限制了其使用和普及。目前角鯊烯主要來(lái)源于深海鯊魚(yú),然而深海鯊魚(yú)屬于稀缺資源,并且對(duì)維護(hù)海洋生態(tài)環(huán)境平衡非常重要,與此同時(shí)角鯊烯較高的生產(chǎn)成本及鯊魚(yú)自身安全衛(wèi)生問(wèn)題,使尋找角鯊烯新來(lái)源顯得十分迫切�；瘜W(xué)合成角鯊烯的技術(shù)復(fù)雜且不穩(wěn)定,植物角鯊烯來(lái)源廣泛但是含量極低,從而使利用海洋微生物生產(chǎn)角鯊烯成為引人矚目的發(fā)展趨勢(shì),海洋微生物菌株發(fā)酵獲取角鯊烯具有質(zhì)量?jī)?yōu)質(zhì)、生產(chǎn)周期短、不受時(shí)間地域限制、易操作、安全衛(wèi)生等優(yōu)點(diǎn)。因此,本研究分離獲得一株高產(chǎn)角鯊烯菌株,對(duì)其生理生化性質(zhì)進(jìn)行研究,并進(jìn)一步進(jìn)行發(fā)酵優(yōu)化,最終得到利用該菌株進(jìn)行微生物發(fā)酵生產(chǎn)角鯊烯的整套工藝,為微生物生產(chǎn)角鯊烯工業(yè)化提供基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果如下：1.對(duì)實(shí)驗(yàn)室從云南、廣東、浙江、海南的紅樹(shù)林、海灘與河口的采集的腐葉、水樣、泥樣中篩選的菌株進(jìn)行分離純化,并對(duì)其產(chǎn)角鯊烯能力進(jìn)行測(cè)定,其中,角鯊烯產(chǎn)量0.15g.L-1的菌株兩株,0.25g.L-1的一株,并建立菌種庫(kù)。2.采用微生物學(xué)手段分離篩選得到高產(chǎn)角鯊烯菌株P(guān)seudozyma sp.SD301,并運(yùn)用分子生物學(xué)手段進(jìn)行種屬鑒定,結(jié)合對(duì)其形態(tài)學(xué)及理化性質(zhì)進(jìn)的研究,確定了Pseudozyma sp.SDS01的種屬為類(lèi)酵母。3.通過(guò)單因素試驗(yàn)、Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)條件,得到響應(yīng)面模型,通過(guò)Design expert軟件分析得到在葡萄糖濃度為67.22 g L-1、接種量為1.53%、培養(yǎng)溫度為26℃、裝液量在41 mL/250 mL的最優(yōu)培養(yǎng)條件下,角鯊烯產(chǎn)量理論最大值可達(dá)1.1508 g L-1。為了檢驗(yàn)?zāi)Ｐ皖A(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性,在優(yōu)化的條件下進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,所得角鯊烯產(chǎn)量為1.1520 g L-1,與預(yù)測(cè)產(chǎn)量十分接近,由此判斷該模型能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)實(shí)際發(fā)酵情況。使用5L發(fā)酵罐培養(yǎng)Pseudozyma sp.SD301,在批次培養(yǎng)中,角鯊烯產(chǎn)量為0.7899g L-1。
【關(guān)鍵詞】：角鯊烯 Pseudozyma 發(fā)酵優(yōu)化 響應(yīng)面
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R915
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-20
• 1.1 引言12
• 1.2 角鯊烯研究進(jìn)展12-15
• 1.2.1 角鯊烯的發(fā)現(xiàn)12
• 1.2.2 角鯊烯的來(lái)源12-13
• 1.2.3 角鯊烯的化學(xué)結(jié)構(gòu)13
• 1.2.4 角鯊烯的理化性質(zhì)13
• 1.2.5 角鯊烯的生理功能13-14
• 1.2.6 角鯊烯的應(yīng)用14-15
• 1.3 角鯊烯的合成途徑15-18
• 1.3.1 化學(xué)合成方法16-17
• 1.3.1.1 復(fù)雜合成路線16-17
• 1.3.2 微生物發(fā)酵法生產(chǎn)角鯊烯17-18
• 1.3.2.1 微生物發(fā)酵生產(chǎn)角鯊烯的研究17-18
• 1.4 角鯊烯的分離、檢測(cè)、保存18-20
• 1.4.1 角鯊烯的提取分離方法18-19
• 1.4.2 角鯊烯的分析檢測(cè)19
• 1.4.3 角鯊烯的保存19-20
• 第二章 產(chǎn)角鯊烯海洋類(lèi)酵母菌的篩選20-39
• 2.1 前言20
• 2.2 材料與方法20-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 2.3 結(jié)果與分析25-38
• 2.3.1 菌株形態(tài)25
• 2.3.2 菌株產(chǎn)角鯊烯能力測(cè)定結(jié)果25-30
• 2.3.3 分子生物學(xué)鑒定及細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征30-33
• 2.3.4 Pseudozyma sp.SD 301理化性質(zhì)研究33-38
• 2.3.4.1 油脂含量的測(cè)定33-34
• 2.3.4.2 總糖的測(cè)定34-35
• 2.3.4.3 灰分測(cè)定35-36
• 2.3.4.4 元素分析36
• 2.3.4.5 Pseudozyma sp.SD 301譜圖36-38
• 2.4 本章小結(jié)38-39
• 第三章 海洋類(lèi)酵母Pseudozyma sp.SD301培養(yǎng)條件的初步研究39-67
• 3.1 引言39
• 3.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料39-41
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株39
• 3.2.2 培養(yǎng)基39
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑39-40
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器40-41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法41
• 3.3.1 種子培養(yǎng)方法41
• 3.3.2 搖瓶發(fā)酵方法41
• 3.3.3 細(xì)胞干重檢測(cè)方法41
• 3.3.4 角鯊烯的提取41
• 3.3.5 角鯊烯含量測(cè)定41
• 3.4 Pseudozyma sp.SD 301搖瓶發(fā)酵初步研究41-42
• 3.5 結(jié)果與討論42-64
• 3.5.1 生長(zhǎng)曲線的初步探索42-43
• 3.5.2 碳源對(duì)發(fā)酵的影響43-45
• 3.5.3 N源對(duì)發(fā)酵影響45-46
• 3.5.4 葡萄糖濃度對(duì)發(fā)酵的影響46-48
• 3.5.5 酵母提取物濃度對(duì)發(fā)酵影響48-49
• 3.5.6 海水素濃度對(duì)發(fā)酵影響49-51
• 3.5.7 MgSO_4對(duì)發(fā)酵影響51
• 3.5.8 KH_2P_4對(duì)發(fā)酵影響51-53
• 3.5.9 初始pH對(duì)發(fā)酵影響53-54
• 3.5.10 溫度對(duì)發(fā)酵影響54-56
• 3.5.11 接種量對(duì)發(fā)酵的影響56-57
• 3.5.12 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)發(fā)酵影響57-58
• 3.5.13 種齡對(duì)發(fā)酵影響58-60
• 3.5.14 裝液量對(duì)發(fā)酵的影響60-61
• 3.5.15 四角錐形瓶對(duì)發(fā)酵的影響61-63
• 3.5.16 培養(yǎng)基對(duì)發(fā)酵的影響63
• 3.5.17 角鯊烯不同提取方法63-64
• 3.6 單因素最優(yōu)條件下的生長(zhǎng)曲線64-66
• 3.7 本章小結(jié)66-67
• 第四章 海洋類(lèi)酵母Pseudozyma sp.SD 301產(chǎn)角鯊烯培養(yǎng)條件的優(yōu)化67-82
• 4.1 引言67-68
• 4.2 材料與方法68-69
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料及培養(yǎng)條件68
• 4.2.2 角鯊烯的提取68
• 4.2.3 角鯊烯分析方法68
• 4.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)68-69
• 4.3 結(jié)果與分析69-81
• 4.3.1 影響角鯊烯發(fā)酵的重要因素69-71
• 4.3.2 響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵條件71-76
• 4.3.3 響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基76-79
• 4.3.4 5L發(fā)酵罐培養(yǎng)Pseudozyma sp. 30179-81
• 4.4 本章小結(jié)81-82
• 第五章 總結(jié)與展望82-84
• 5.1 論文總結(jié)82
• 5.2 展望82-84
• 參考文獻(xiàn)84-91
• 附錄91-93
• 致謝93-94
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷94
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果94

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本文編號(hào)：369132