本文關鍵詞：高產(chǎn)角鯊烯類酵母Pseudozyma sp.SD 301的篩選、鑒定及發(fā)酵條件的優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：角鯊烯是重要的化學活性物質,因其具有抗腫瘤、緩衰老、抗病毒等多種生理功能而被廣泛應用于醫(yī)藥、食品、化妝品等領域。但是角鯊烯昂貴的價格限制了其使用和普及。目前角鯊烯主要來源于深海鯊魚,然而深海鯊魚屬于稀缺資源,并且對維護海洋生態(tài)環(huán)境平衡非常重要,與此同時角鯊烯較高的生產(chǎn)成本及鯊魚自身安全衛(wèi)生問題,使尋找角鯊烯新來源顯得十分迫切�；瘜W合成角鯊烯的技術復雜且不穩(wěn)定,植物角鯊烯來源廣泛但是含量極低,從而使利用海洋微生物生產(chǎn)角鯊烯成為引人矚目的發(fā)展趨勢,海洋微生物菌株發(fā)酵獲取角鯊烯具有質量優(yōu)質、生產(chǎn)周期短、不受時間地域限制、易操作、安全衛(wèi)生等優(yōu)點。因此,本研究分離獲得一株高產(chǎn)角鯊烯菌株,對其生理生化性質進行研究,并進一步進行發(fā)酵優(yōu)化,最終得到利用該菌株進行微生物發(fā)酵生產(chǎn)角鯊烯的整套工藝,為微生物生產(chǎn)角鯊烯工業(yè)化提供基礎。具體研究結果如下：1.對實驗室從云南、廣東、浙江、海南的紅樹林、海灘與河口的采集的腐葉、水樣、泥樣中篩選的菌株進行分離純化,并對其產(chǎn)角鯊烯能力進行測定,其中,角鯊烯產(chǎn)量0.15g.L-1的菌株兩株,0.25g.L-1的一株,并建立菌種庫。2.采用微生物學手段分離篩選得到高產(chǎn)角鯊烯菌株Pseudozyma sp.SD301,并運用分子生物學手段進行種屬鑒定,結合對其形態(tài)學及理化性質進的研究,確定了Pseudozyma sp.SDS01的種屬為類酵母。3.通過單因素試驗、Plackett-Burman實驗設計,響應面法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)條件,得到響應面模型,通過Design expert軟件分析得到在葡萄糖濃度為67.22 g L-1、接種量為1.53%、培養(yǎng)溫度為26℃、裝液量在41 mL/250 mL的最優(yōu)培養(yǎng)條件下,角鯊烯產(chǎn)量理論最大值可達1.1508 g L-1。為了檢驗模型預測的準確性,在優(yōu)化的條件下進行發(fā)酵實驗驗證,所得角鯊烯產(chǎn)量為1.1520 g L-1,與預測產(chǎn)量十分接近,由此判斷該模型能準確預測實際發(fā)酵情況。使用5L發(fā)酵罐培養(yǎng)Pseudozyma sp.SD301,在批次培養(yǎng)中,角鯊烯產(chǎn)量為0.7899g L-1。
【關鍵詞】：角鯊烯 Pseudozyma 發(fā)酵優(yōu)化 響應面
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R915
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 第一章 文獻綜述12-20
• 1.1 引言12
• 1.2 角鯊烯研究進展12-15
• 1.2.1 角鯊烯的發(fā)現(xiàn)12
• 1.2.2 角鯊烯的來源12-13
• 1.2.3 角鯊烯的化學結構13
• 1.2.4 角鯊烯的理化性質13
• 1.2.5 角鯊烯的生理功能13-14
• 1.2.6 角鯊烯的應用14-15
• 1.3 角鯊烯的合成途徑15-18
• 1.3.1 化學合成方法16-17
• 1.3.1.1 復雜合成路線16-17
• 1.3.2 微生物發(fā)酵法生產(chǎn)角鯊烯17-18
• 1.3.2.1 微生物發(fā)酵生產(chǎn)角鯊烯的研究17-18
• 1.4 角鯊烯的分離、檢測、保存18-20
• 1.4.1 角鯊烯的提取分離方法18-19
• 1.4.2 角鯊烯的分析檢測19
• 1.4.3 角鯊烯的保存19-20
• 第二章 產(chǎn)角鯊烯海洋類酵母菌的篩選20-39
• 2.1 前言20
• 2.2 材料與方法20-25
• 2.2.1 實驗材料20-21
• 2.2.2 實驗方法21-25
• 2.3 結果與分析25-38
• 2.3.1 菌株形態(tài)25
• 2.3.2 菌株產(chǎn)角鯊烯能力測定結果25-30
• 2.3.3 分子生物學鑒定及細胞形態(tài)學特征30-33
• 2.3.4 Pseudozyma sp.SD 301理化性質研究33-38
• 2.3.4.1 油脂含量的測定33-34
• 2.3.4.2 總糖的測定34-35
• 2.3.4.3 灰分測定35-36
• 2.3.4.4 元素分析36
• 2.3.4.5 Pseudozyma sp.SD 301譜圖36-38
• 2.4 本章小結38-39
• 第三章 海洋類酵母Pseudozyma sp.SD301培養(yǎng)條件的初步研究39-67
• 3.1 引言39
• 3.2 實驗儀器與材料39-41
• 3.2.1 實驗菌株39
• 3.2.2 培養(yǎng)基39
• 3.2.3 實驗試劑39-40
• 3.2.4 實驗儀器40-41
• 3.3 實驗方法41
• 3.3.1 種子培養(yǎng)方法41
• 3.3.2 搖瓶發(fā)酵方法41
• 3.3.3 細胞干重檢測方法41
• 3.3.4 角鯊烯的提取41
• 3.3.5 角鯊烯含量測定41
• 3.4 Pseudozyma sp.SD 301搖瓶發(fā)酵初步研究41-42
• 3.5 結果與討論42-64
• 3.5.1 生長曲線的初步探索42-43
• 3.5.2 碳源對發(fā)酵的影響43-45
• 3.5.3 N源對發(fā)酵影響45-46
• 3.5.4 葡萄糖濃度對發(fā)酵的影響46-48
• 3.5.5 酵母提取物濃度對發(fā)酵影響48-49
• 3.5.6 海水素濃度對發(fā)酵影響49-51
• 3.5.7 MgSO_4對發(fā)酵影響51
• 3.5.8 KH_2P_4對發(fā)酵影響51-53
• 3.5.9 初始pH對發(fā)酵影響53-54
• 3.5.10 溫度對發(fā)酵影響54-56
• 3.5.11 接種量對發(fā)酵的影響56-57
• 3.5.12 搖床轉速對發(fā)酵影響57-58
• 3.5.13 種齡對發(fā)酵影響58-60
• 3.5.14 裝液量對發(fā)酵的影響60-61
• 3.5.15 四角錐形瓶對發(fā)酵的影響61-63
• 3.5.16 培養(yǎng)基對發(fā)酵的影響63
• 3.5.17 角鯊烯不同提取方法63-64
• 3.6 單因素最優(yōu)條件下的生長曲線64-66
• 3.7 本章小結66-67
• 第四章 海洋類酵母Pseudozyma sp.SD 301產(chǎn)角鯊烯培養(yǎng)條件的優(yōu)化67-82
• 4.1 引言67-68
• 4.2 材料與方法68-69
• 4.2.1 實驗材料及培養(yǎng)條件68
• 4.2.2 角鯊烯的提取68
• 4.2.3 角鯊烯分析方法68
• 4.2.4 實驗設計68-69
• 4.3 結果與分析69-81
• 4.3.1 影響角鯊烯發(fā)酵的重要因素69-71
• 4.3.2 響應面法優(yōu)化發(fā)酵條件71-76
• 4.3.3 響應面法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基76-79
• 4.3.4 5L發(fā)酵罐培養(yǎng)Pseudozyma sp. 30179-81
• 4.4 本章小結81-82
• 第五章 總結與展望82-84
• 5.1 論文總結82
• 5.2 展望82-84
• 參考文獻84-91
• 附錄91-93
• 致謝93-94
• 個人簡歷94
• 在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果94

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  本文關鍵詞：高產(chǎn)角鯊烯類酵母Pseudozyma sp.SD 301的篩選、鑒定及發(fā)酵條件的優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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