目的:建立細胞色素P450酶3A4（CYP3A4）、1A2（CYP1A2）及2E1（CYP2E1）的快速免疫印跡（Western blot）檢測方法。方法:培養(yǎng)Hep G2細胞并提取總蛋白,飼養(yǎng)大鼠并制備肝組織勻漿液、S9以及微粒體,以4種標(biāo)本為對象分別以不同的封閉時間、抗體孵育時間和分離膠類型等常規(guī)Western blot條件設(shè)置A、B、C、D、E及F組用以考察CYP3A4的最佳檢測條件;使用Western blot快速孵育儀,分別以不同的Western blot封閉和抗體孵育時間條件設(shè)置A、B、C和D、E、F及G、H、I組分別用以考察CYP3A4、CYP1A2及CYP2E1的最佳檢測條件。結(jié)果:常規(guī)Western blot不同條件下,對CYP3A4的檢測中C組檢測靈敏度在Hep G2、肝微粒體樣品檢測中高于A、B、D、E及F組（P ＜0.05）,在組織勻漿、S9樣品檢測中C組檢測靈敏度高于A、B、E組（P ＜0.05）;在使用Western blot快速孵育儀孵育條件下,對CYP3A4的檢測C組靈敏度在Hep G2、肝組織勻漿及S9樣品檢測中高于A、B組（P ＜0.05）,在肝微粒... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物及細胞
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 Hep G2細胞樣品總蛋白的制備
        1.2.2 大鼠肝組織勻漿蛋白、S9及微粒體的制備
        1.2.3 蛋白濃度測定
        1.2.4 Western blot檢測
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 CYP3A4搖床封閉孵育檢測條件優(yōu)化
    2.2 CYP3A4、1A2及2E1 Western blot快速孵育儀孵育檢測條件的優(yōu)化
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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