血清淀粉樣蛋白A（Serum amyloid A,SAA）是一類血清蛋白家族的統(tǒng)稱,在各種動(dòng)物組織中高度保守。成熟的SAA蛋白質(zhì)大小為12¹4 kD,一級結(jié)構(gòu)由103¹04個(gè)氨基酸序列組成,不同的SAA二級結(jié)構(gòu)有不同的寡聚狀態(tài)。SAA與疾病高度相關(guān),參與很多疾病的致病性,在免疫中也有重要作用。研究表明,SAA對許多革蘭氏陰性菌具有抑制作用,但對真菌的抑制作用尚不得知。因此,探究SAA對真菌的抑制功能,將為SAA的抑菌機(jī)制的研究或者新的抑菌機(jī)制的提出奠定良好的基礎(chǔ),同時(shí)也為新藥研發(fā)提供理論指導(dǎo)。本研究以重組人SAA1蛋白為研究對象,原核表達(dá)帶有His標(biāo)簽的SAA1蛋白,過鎳柱獲得純化蛋白。同時(shí)探索了SAA1蛋白對白色念珠菌SC5314的抑菌效果。主要研究過程及結(jié)果如下。1.重組質(zhì)粒的構(gòu)建:克隆人SAA1三亞型基因,將其與載體pET-28a連接,獲得重組載體。2.目的蛋白的誘導(dǎo)、純化與鑒定。將重組載體轉(zhuǎn)化到KS1000、BL21（DE3）、Rosetta（DE3）、Rosetta gami2（DE3）四種宿主表達(dá)菌中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-P... 

【文章來源】：南陽師范學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人SAA1氨基酸序列

不同亞型血清淀粉樣蛋白 A1 的原核表達(dá)及其抗白色念珠菌活性研究他螺旋束不同，SAA1.1 螺旋束是錐形的，螺旋 1 和螺旋 3 的 N 末端以及螺旋 2 和螺旋 4 的 C 末端緊密堆積在一起（圖 1-2A）。C 末端尾部是 89~104 殘基，有序排列并包裹在束的一個(gè)面上，與四個(gè)α-螺旋中的三個(gè)形成多個(gè)鹽橋和氫鍵，包括螺旋 1 的 2位上 Glu 和 29 位上 Tyr，螺旋 2 的 35 位上 Tyr 和 39 位上 Arg，和螺旋 4 的 85 位上Trp 和 86 位上 Gly（圖 1-2C）。值得注意的是，104 位上 Tyr 的 C 末端羧基與 35 位上的 Tyr，39 位上的 Arg 和 96 位上的 Arg 形成四殘基電荷簇（圖 1-2C））。在該電荷四聯(lián)體中，C 末端羧基和 35 位上 Tyr 的 OH 與 39 位 Arg 和 96 位 Arg 形成分叉鹽橋，有效地鎖定羧酸酯末端。C 端尾部和 SAA1.1 螺旋之間廣泛且保守地相互作用表明，C 尾部功能穩(wěn)定了 SAA1.1 螺旋束結(jié)構(gòu)。

2.3.2 感受態(tài)細(xì)胞的效果檢驗(yàn)為了檢驗(yàn)制備的感受態(tài)效果，將pET-28a-saa1γ重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到四種制備的感受態(tài)菌株中，涂板、培養(yǎng)，結(jié)果如圖2-1所示。可以看出，大腸桿菌KS1000（DE3）、BL21（DE3）、Rosetta（DE3）三種感受態(tài)菌落很多；但大腸桿菌Rosetta gami2（DE3）轉(zhuǎn)化后的菌落最少，重新做后菌落也比較多（此處未給出重做結(jié)果）。以上結(jié)果表明制備的四種感受態(tài)質(zhì)量高，易于接受外源DNA。

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本文編號：3595124