目的:血管活性腸肽（Vasoactive intestinal peptide,VIP）作為一種腦腸肽,與神經(jīng)肽垂體腺苷酸環(huán)化酶激活多肽（Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP）具有高度同源性;對(duì)神經(jīng)退行性疾病,如阿爾茨海默癥等的治療具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。VIP可通過(guò)非特異性的跨膜作用穿越血腦屏障（Blood–brain barrier,BBB）,但是其在體內(nèi)較短的半衰期和較低的穿越生物屏障的效率阻止其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的應(yīng)用。TAT由11個(gè)氨基酸殘基組成,是一種具有有效提高生物屏障穿越作用的穿膜肽（Cell penetrating peptide）。本文利用基因工程原理及技術(shù)構(gòu)建能有效穿越BBB的重組蛋白質(zhì)VIP-TAT（M/L）,利用蛋白內(nèi)含肽介導(dǎo)蛋白純化相關(guān)技術(shù)實(shí)現(xiàn)其制備;通過(guò)建立神經(jīng)細(xì)胞凋亡模型,檢測(cè)重組多肽VIP-TAT（M/L）的抗凋亡能力;并進(jìn)一步對(duì)其抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)制進(jìn)行探索。方法:通過(guò)設(shè)計(jì)編碼VIP-TAT（M/L）的基因,克隆到表達(dá)載體pKYB,構(gòu)建重組表達(dá)載體p KYB-VIP-TAT（M/L）... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PTD的功能Fig.1-1ThefunctionofPTD

癥免疫治療等研究領(lǐng)域均具有良好的應(yīng)用前景。.3 蛋白內(nèi)含肽介導(dǎo)純化.3.1 蛋白內(nèi)含肽簡(jiǎn)介蛋白內(nèi)含肽(intein)是 20 世紀(jì) 90 年代發(fā)現(xiàn)的一種新的蛋白功能元件[68,69]。它存在于前體蛋白質(zhì)的多肽鏈內(nèi)部一段氨基酸序列。在轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓鞍踪|(zhì)時(shí)，通過(guò)非酶促的轉(zhuǎn)應(yīng)即通過(guò)自身催化作用將其兩端(N 端和 C 端)的蛋白外顯肽(extein)連接，而自身則從蛋白質(zhì)中脫落下來(lái)，此過(guò)程不需要任何能量、輔助因子和酶，該過(guò)程主要涉及到化學(xué)重排，蛋白質(zhì)自剪切過(guò)程完全由蛋白質(zhì)內(nèi)含子的氨基酸介導(dǎo)，與內(nèi)含子的氨基酸序列量以及位置有關(guān)[70]。自從 1990 年從啤酒酵母(S.cerevisiae)中發(fā)現(xiàn)了第 1 個(gè)蛋白內(nèi)含肽，陸續(xù)在古細(xì)菌、單細(xì)胞真核生物、真細(xì)菌中相繼發(fā)現(xiàn)了大約 120 種的蛋白內(nèi)含肽。內(nèi)含肽結(jié)構(gòu)(見 Fig.1-2)。

暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文會(huì)完全被封阻。 (2) 通過(guò)剪切位點(diǎn) C 末端的半胱氨酸或絲分枝酯鍵中間體。剪切連接處下游半胱氨酸的巰基或絲氨酸剪切處的前面的羰基碳原子，導(dǎo)致 N 端 extein轉(zhuǎn)移到 C 端 ex結(jié)構(gòu)的形成是可逆的。 (3) InteinC 末端剪切處的天冬酰胺分枝酯鍵中間體斷裂, 產(chǎn)生帶有 C 末端琥珀酰亞胺環(huán)的 intein。倒數(shù)第二個(gè)氨基酸組氨酸對(duì)于鄰近天冬酰胺的環(huán)化有輔基酸時(shí)，會(huì)影響 C 末端的切割反應(yīng)。 (4) 琥珀酰亞胺環(huán)水解N 或 S－N �；嘏�，產(chǎn)生穩(wěn)定自然的肽鍵[71]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]噬菌體展示肽庫(kù)篩選VPAC1高親和力結(jié)合多肽[J]. 唐波,黃定德,鄭磊,任浩,李前偉.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(01)
[2]包涵體蛋白的分離和色譜法體外復(fù)性純化研究進(jìn)展[J]. 王增,馬會(huì)勤,張文,陳尚武.  中國(guó)生物工程雜志. 2009(07)
[3]血管活性腸肽對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用的研究進(jìn)展[J]. 司秀文,劉明,李梅,梁統(tǒng),周克元.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2009(05)
[4]阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制及藥物治療的進(jìn)展[J]. 吳思緲,周黎明.  四川生理科學(xué)雜志. 2009(01)
[5]重組蛋白包涵體的研究進(jìn)展[J]. 李軍,劉美杰,李勇,竇忠英.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(31)
[6]腸易激綜合征患者結(jié)腸黏膜P物質(zhì)、血管活性腸肽和肥大細(xì)胞的變化[J]. 陳曉敏,張燕華,毛峻嶺,張賽森,陸倫根.  胃腸病學(xué). 2008(04)
[7]隔姜灸對(duì)肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸血管活性腸肽和白介素-10水平的影響[J]. 王軼,張燕生,杜炳林,鐘馨.  云南中醫(yī)中藥雜志. 2008(04)
[8]抗菌肽的結(jié)構(gòu)特征及其與活性的關(guān)系[J]. 劉琳,馬廷方,祝永強(qiáng),姚菊明.  藥物生物技術(shù). 2008(01)
[9]VPAC2在CHO細(xì)胞的表達(dá)及鑒定[J]. 余榕捷,高媛,戴云,譚毅力,曾志宏,周天鴻,洪岸.  生物工程學(xué)報(bào). 2006(06)
[10]包涵體復(fù)性研究進(jìn)展(英文)[J]. 龔平生,羅貴民.  中國(guó)生物工程雜志. 2003(12)

博士論文
[1]血管活性腸肽調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞功能減少轉(zhuǎn)基因AD小鼠老年斑沉積的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 宋敏.第三軍醫(yī)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]B族G蛋白偶聯(lián)受體PAC1二聚化及其N端HSDCIF基序?qū)ζ涠刍挠绊慬D]. 郭曉令.暨南大學(xué) 2013
[2]重組多肽VIP-TAT的制備及其抗東莨菪堿誘導(dǎo)的記憶缺失作用的研究[D]. 曾智星.暨南大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3578031