目的研究他莫昔芬（TAM）誘導(dǎo)人類(lèi)淋巴母細(xì)胞（TK6細(xì)胞）DNA損傷的機(jī)制。方法采用MTT法檢測(cè)TAM對(duì)TK6細(xì)胞活性的影響;采用免疫熒光分析和染色體畸變?cè)囼?yàn)研究TAM對(duì)TK6細(xì)胞的DNA損傷作用。結(jié)果 TAM對(duì)TK6細(xì)胞的存活率呈劑量依賴(lài)性抑制,與野生型細(xì)胞（WT）比較,敲除Ligase4基因的細(xì)胞(Ligase4^-/-)對(duì)TAM呈現(xiàn)出高度敏感性;與陰性對(duì)照組比較,TK6細(xì)胞經(jīng)TAM處理后形成了明顯增多的DNA損傷;Ligase4^-/-與WT比較,形成了顯著增多的DNA損傷。結(jié)論 TAM可以誘導(dǎo)TK6細(xì)胞產(chǎn)生DNA損傷,Ligase4參與了TAM誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)。 

【文章來(lái)源】：華西藥學(xué)雜志. 2020,35(01)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

WT TK6細(xì)胞核中γ-H2AX foci表達(dá)的免疫熒光染色照片(A)與細(xì)胞中染色體畸變核型分析圖(B)(×1000,箭頭所示為染色體斷裂)

為了探究NHEJ功能缺陷細(xì)胞Ligase4-/-對(duì)TAM的敏感性是否與TAM誘導(dǎo)的DNA損傷相關(guān),對(duì)相同條件處理后的Ligase4-/-與WT細(xì)胞中形成的γ-H2AX foci進(jìn)行了比較分析。根據(jù)測(cè)得的藥物劑量-細(xì)胞存活率曲線,選取25 μmol·L-1 TAM對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理,并以15 nmol·L-1 ETP作為陽(yáng)性對(duì)照。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn):在各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)(3、6、9 h),與WT比較,Ligase4-/-均形成了明顯增多的γ-H2AX foci,尤其在峰值6 h的時(shí)候,Ligase4-/-平均每個(gè)細(xì)胞中γ-H2AX foci的數(shù)目超過(guò)了12個(gè),而WT中只有不到7個(gè)(P<0.05)。這種趨勢(shì)與陽(yáng)性藥ETP相似(圖4)。結(jié)果表明:與WT比較,TAM誘導(dǎo)Ligase4-/-形成了更多的DNA損傷,因此,推測(cè)Ligase4-/-表現(xiàn)出的對(duì)TAM的敏感性可能與TAM誘導(dǎo)的DNA損傷相關(guān)。1.2.5 染色體畸變的比較分析

為了進(jìn)一步驗(yàn)證Ligase4-/-對(duì)TAM的敏感性是否與TAM誘導(dǎo)的DNA損傷相關(guān),采用染色體畸變分析方法對(duì)相同條件處理后的Ligase4-/-與WT細(xì)胞中形成的染色體畸變數(shù)目進(jìn)行了比較分析。按“1.2.3”項(xiàng)下染色體畸變?cè)囼?yàn)方法,用25 μmol·L-1 TAM對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理,并以15 nmol·L-1 ETP作為陽(yáng)性對(duì)照。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:Ligase4-/-在12、24、36 h各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)均比WT形成了更多的染色體畸變,尤其是在峰值24 h,Ligase4-/-染色體畸變的數(shù)目顯著高于WT(P<0.05)。這種趨勢(shì)與陽(yáng)性藥ETP相似(圖5)。結(jié)果表明:經(jīng)TAM處理后,Ligase4-/-比WT細(xì)胞形成了更多的DNA損傷,從而進(jìn)一步驗(yàn)證了Ligase4-/-表現(xiàn)出的對(duì)TAM的敏感性可能與TAM誘導(dǎo)的DNA損傷相關(guān)。1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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