人甲狀旁腺素（human parathyroid hormone）是由人甲狀旁腺主細(xì)胞分泌出來的活性多肽,通過調(diào)節(jié)腎臟、骨骼等細(xì)胞來維持磷酸鹽和血鈣的自身的穩(wěn)定。人甲狀旁腺素1-84（PTH 1-84）含有84個(gè)氨基酸的多肽鏈分子,分子量是9.5 kDa。在人體內(nèi)是由甲狀旁腺主細(xì)胞產(chǎn)生的。調(diào)節(jié)人體的骨轉(zhuǎn)換及磷、鈣的代謝。近幾年來的醫(yī)學(xué)研究證明,PTH在用于治療骨質(zhì)疏松上有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值,療效也很好且沒有其他副作用,而且還可以作為甲狀腺功能亢進(jìn)的取代藥物。本文研究的PTH 1-84是通過基因工程重組技術(shù)開發(fā)的一種蛋白藥物,生理作用為調(diào)節(jié)鈣磷代謝,腎、骨和小腸是靶器官,維持人體血鈣的穩(wěn)定,作用靶點(diǎn)明確、機(jī)理清楚,主治絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥。本文主要的研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面:利用基因工程方法以E.coli BL-21為宿主菌,將人甲狀旁腺素基因連接到pGEX-4T-1載體,形成重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-hPTH,導(dǎo)入宿主菌中,表達(dá)融合蛋白,通過對(duì)誘導(dǎo)條件和IPTG的濃度的優(yōu)化,確定了最終的培養(yǎng)條件為:OD₆₀₀值為20開始誘導(dǎo),IPTG的濃度為0.6 mM,誘導(dǎo)時(shí)... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 綜述
    1.1 課題研究背景
    1.2 PTH的結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.1 甲狀旁腺素的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 甲狀旁腺素生理功能
        1.2.3 臨床應(yīng)用
    1.3 PTH的表達(dá)
    1.4 PTH(1-84)國內(nèi)外的研究現(xiàn)狀
        1.4.1 rhPTH(1-84)的藥理、毒理研究
        1.4.2 rhPTH(1-84)的臨床研究
    1.5 原核表達(dá)方法
        1.5.1 表達(dá)前的準(zhǔn)備要素
        1.5.2 獲得目的基因
        1.5.3 構(gòu)建表達(dá)載體
        1.5.4 轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌
        1.5.5 誘導(dǎo)表達(dá)
        1.5.6 表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)
    1.6 純化方法的選擇及組合
        1.6.1 凝膠層析
        1.6.2 離子交換層析
        1.6.3 親和層析
        1.6.4 疏水層析
    1.7 本文研究的主要內(nèi)容及意義
        1.7.1 本文研究的主要內(nèi)容
        1.7.2 本文研究的意義
2 重組人甲狀旁腺素1-84 的表達(dá)
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 發(fā)酵生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.3.2 7L發(fā)酵結(jié)果
        2.3.3 100L發(fā)酵工藝放大結(jié)果
    2.4 小結(jié)
3 重組人甲狀旁腺素1-84 的純化
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
        3.3.1 菌體破碎及DEAE層析結(jié)果
        3.3.2 親和層析
        3.3.3 超濾置換酶切緩沖液
        3.3.4 EK酶切條件優(yōu)化
        3.3.5 Capto Q層析
        3.3.6 SP層析
        3.3.7 CM層析
    3.4 小結(jié)
4 人甲狀旁腺素1-84 生物活性測(cè)定
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑和材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 試劑配制
        4.3.2 細(xì)胞準(zhǔn)備
        4.3.3 樣品處理
        4.3.4 加樣
        4.3.5 ELISA檢測(cè)
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        4.4.1 生物學(xué)活性計(jì)算
        4.4.2 判斷標(biāo)準(zhǔn)
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨質(zhì)疏松癥治療新藥-甲狀旁腺激素的研究進(jìn)展[J]. 劉娟,王斌,張杰.  藥物生物技術(shù). 2004(03)
[2]骨質(zhì)疏松骨折的住院治療費(fèi)用（1996～2001年）統(tǒng)計(jì)[J]. 符詩聰,胡建霖,羅仕華,許勇.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2003(02)
[3]雌激素替代療法的利與弊[J]. 王莉,孔德誠.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2001(03)
[4]中國人骨質(zhì)疏松癥建議診斷標(biāo)準(zhǔn)(第二稿)[J].   中國骨質(zhì)疏松雜志. 2000(01)
[5]北京市髖部骨折發(fā)生率流行病學(xué)研究[J]. 劉愛民,徐苓,趙熙和,陳孝曙,Steven R Cummings.  中華流行病學(xué)雜志. 1996(01)



本文編號(hào)：3562373