[目的]研究硝普鈉（Sodium nitroprusside, SNP）誘導(dǎo)豬軟骨細(xì)胞凋亡的適宜劑量和作用時(shí)間,構(gòu)建豬軟骨細(xì)胞的凋亡模型。[方法]體外培養(yǎng)并鑒定豬踝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞。分別用0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的SNP處理軟骨細(xì)胞。于12、24、48 h后分別檢測(cè)軟骨細(xì)胞增殖、凋亡和線粒體膜電位。[結(jié)果]隨SNP濃度增加,細(xì)胞增殖呈曲線改變,SNP在0.1 mmol/L時(shí)OD值達(dá)峰值,而后下降,不同濃度SNP組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。相同SNP不同時(shí)間點(diǎn)的差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。凋亡檢測(cè)顯示0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L SNP處理的豬軟骨細(xì)胞發(fā)生了凋亡,且凋亡率隨SNP濃度的增大而加大。線粒體膜電位染色顯示隨著SNP濃度的增大,豬軟骨細(xì)胞的紅色熒光強(qiáng)度與綠色熒光強(qiáng)度的相對(duì)比值逐漸縮小。[結(jié)論] 0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L SNP均引發(fā)了豬軟骨細(xì)胞凋亡,可以用于構(gòu)建豬軟骨細(xì)胞凋亡模型。且當(dāng)SNP的濃度逐漸增大,豬軟骨細(xì)胞的線粒體膜電位逐漸減小。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)矯形外科雜志. 2020,28(15)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度SNP處理后的豬軟骨細(xì)胞的jc-1染色（×200)a：此時(shí)紅色熒光最強(qiáng)，細(xì)胞處于正常狀態(tài)，線粒體膜電位最高b：紅色熒光開(kāi)始減弱且綠色熒光開(kāi)始增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位開(kāi)始下降c：紅色熒光進(jìn)一步減弱且綠色熒光繼續(xù)增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位進(jìn)一步下降d：紅色熒光減弱速度和綠色熒光增強(qiáng)速率以及細(xì)胞線粒體膜電位下降速度均變緩e：綠色熒光達(dá)到最強(qiáng)，此時(shí)細(xì)胞線粒體膜電位最低f：各組間的紅色和綠色相對(duì)熒光強(qiáng)度比值之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（***P<0.001,n=6）；隨著SNP濃度的增大，紅光和綠光的相對(duì)熒光的比值逐漸減小，說(shuō)明線粒體膜電位隨著SNP的增大而逐漸降低

通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察經(jīng)過(guò)JC-1染色的軟骨細(xì)胞可以發(fā)現(xiàn)0 mmol/L SNP處理的軟骨細(xì)胞的紅色熒光遠(yuǎn)強(qiáng)于綠色熒光（圖3a）。0.2、0.4、0.8、1.6mmol/L SNP處理的軟骨細(xì)胞的綠色熒光明顯增強(qiáng)，而紅色熒光變化不明顯（圖3b～3e）。利用軟件對(duì)各組的紅色熒光和綠色熒光進(jìn)行半定量且計(jì)算比較各組的紅色熒光和綠色熒光的比值（圖3f）。圖3 激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度SNP處理后的豬軟骨細(xì)胞的jc-1染色（×200)a：此時(shí)紅色熒光最強(qiáng)，細(xì)胞處于正常狀態(tài)，線粒體膜電位最高b：紅色熒光開(kāi)始減弱且綠色熒光開(kāi)始增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位開(kāi)始下降c：紅色熒光進(jìn)一步減弱且綠色熒光繼續(xù)增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位進(jìn)一步下降d：紅色熒光減弱速度和綠色熒光增強(qiáng)速率以及細(xì)胞線粒體膜電位下降速度均變緩e：綠色熒光達(dá)到最強(qiáng)，此時(shí)細(xì)胞線粒體膜電位最低f：各組間的紅色和綠色相對(duì)熒光強(qiáng)度比值之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（***P<0.001,n=6）；隨著SNP濃度的增大，紅光和綠光的相對(duì)熒光的比值逐漸減小，說(shuō)明線粒體膜電位隨著SNP的增大而逐漸降低

圖3 激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度SNP處理后的豬軟骨細(xì)胞的jc-1染色（×200)a：此時(shí)紅色熒光最強(qiáng)，細(xì)胞處于正常狀態(tài)，線粒體膜電位最高b：紅色熒光開(kāi)始減弱且綠色熒光開(kāi)始增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位開(kāi)始下降c：紅色熒光進(jìn)一步減弱且綠色熒光繼續(xù)增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位進(jìn)一步下降d：紅色熒光減弱速度和綠色熒光增強(qiáng)速率以及細(xì)胞線粒體膜電位下降速度均變緩e：綠色熒光達(dá)到最強(qiáng)，此時(shí)細(xì)胞線粒體膜電位最低f：各組間的紅色和綠色相對(duì)熒光強(qiáng)度比值之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（***P<0.001,n=6）；隨著SNP濃度的增大，紅光和綠光的相對(duì)熒光的比值逐漸減小，說(shuō)明線粒體膜電位隨著SNP的增大而逐漸降低圖3 激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度SNP處理后的豬軟骨細(xì)胞的jc-1染色（×200)a：此時(shí)紅色熒光最強(qiáng)，細(xì)胞處于正常狀態(tài)，線粒體膜電位最高b：紅色熒光開(kāi)始減弱且綠色熒光開(kāi)始增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位開(kāi)始下降c：紅色熒光進(jìn)一步減弱且綠色熒光繼續(xù)增強(qiáng)，細(xì)胞線粒體膜電位進(jìn)一步下降d：紅色熒光減弱速度和綠色熒光增強(qiáng)速率以及細(xì)胞線粒體膜電位下降速度均變緩e：綠色熒光達(dá)到最強(qiáng)，此時(shí)細(xì)胞線粒體膜電位最低f：各組間的紅色和綠色相對(duì)熒光強(qiáng)度比值之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（***P<0.001,n=6）；隨著SNP濃度的增大，紅光和綠光的相對(duì)熒光的比值逐漸減小，說(shuō)明線粒體膜電位隨著SNP的增大而逐漸降低


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