研究背景:腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor-associated macrophage,TAM）是腫瘤微環(huán)境基質(zhì)細(xì)胞中重要的組成部分,具有可塑性強(qiáng)和功能多樣的特點。TAM可受腫瘤微環(huán)境影響,被極化為分子特征及生物學(xué)功能完全不同的兩大類TAM亞群,即發(fā)生經(jīng)典極化（Classical polarization）的 M1 型 TAM 以及發(fā)生替代極化（Alternative polarization）的M2型TAM,其中M1型TAM發(fā)揮抗腫瘤作用,而M2型TAM則加速了腫瘤的發(fā)生和演進(jìn)。M2型極化狀態(tài)下的TAM能夠大量合成與釋放抗炎細(xì)胞因子、免疫抑制因子和多種可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生、生長、遷移以及血管淋巴管形成的各種細(xì)胞因子,從而進(jìn)一步促進(jìn)血管的生成和細(xì)胞外基質(zhì)分解和重塑并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞運動。而且巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間的直接交流會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞入侵和轉(zhuǎn)移進(jìn)入血管。因此,M2型巨噬細(xì)胞在促腫瘤轉(zhuǎn)移的微環(huán)境中扮演關(guān)鍵作用,是腫瘤治療的重要靶點。目前靶向腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的治療研究主要有三個方向,一是通過抑制TAM的增殖、存活和招募減少TAM的數(shù)量;二是干預(yù)TAM的M2型極化;三是調(diào)節(jié)TAM的吞噬功能。目前針... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
緒論
第一章 二甲雙胍抑制巨噬細(xì)胞M2型極化及其機(jī)制
    1.1 引言
    1.2 實驗材料與儀器
        1.2.1 細(xì)胞株
        1.2.2 實驗動物
        1.2.3 藥物與主要試劑
        1.2.4 實驗儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 小鼠原代骨髓來源巨噬細(xì)胞的分離及誘導(dǎo)培養(yǎng)
        1.3.3 SRB法檢測細(xì)胞增殖
        1.3.4 流式細(xì)胞術(shù)
        1.3.5 實時熒光定量PCR
        1.3.6 siRNA轉(zhuǎn)染
        1.3.7 Western Blot法檢測蛋白表達(dá)
        1.3.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.4 實驗結(jié)果
        1.4.1 二甲雙胍抑制巨噬細(xì)胞M2型極化
            1.4.1.1 二甲雙胍抑制RAW264.7的M2型極化
            1.4.1.2 二甲雙胍抑制BMDM的M2型極化
            1.4.1.3 二甲雙胍抑制THP1的M2型極化
        1.4.2 二甲雙胍不影響巨噬細(xì)胞的M1型極化
        1.4.3 二甲雙胍通過激活A(yù)MPKα1抑制巨噬細(xì)胞M2型極化
    1.5 討論
第二章 二甲雙胍通過抑制巨噬細(xì)胞M2型極化發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與儀器
        2.2.1 細(xì)胞株
        2.2.2 實驗動物
        2.2.3 藥物與主要試劑
        2.2.4 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 分離及誘導(dǎo)培養(yǎng)小鼠原代骨髄來源巨噬細(xì)胞
        2.3.3 條件培養(yǎng)基制備
        2.3.4 SRB實驗檢測細(xì)胞增殖
        2.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        2.3.6 Transwell小室遷移實驗
        2.3.7 實時熒光定量PCR
        2.3.8 小鼠肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分離與純化
        2.3.9 劃痕修復(fù)實驗
        2.3.10 管腔形成實驗
        2.3.11 動物實驗
        2.3.12 蘇木素&伊紅染色法
        2.3.13 免疫熒光
        2.3.14 免疫組化
        2.3.15 CCL2分泌水平檢測
        2.3.16 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 二甲雙胍抑制M2型巨噬細(xì)胞極化對腫瘤細(xì)胞增殖運動能力的影響
        2.4.2 二甲雙胍抑制M2型巨噬細(xì)胞極化對內(nèi)皮細(xì)胞增殖運動管腔形成能力的影響
        2.4.3 二甲雙胍通過抑制巨噬細(xì)胞M2型極化抑制腫瘤轉(zhuǎn)移
            2.4.3.1 二甲雙胍對小鼠Lewis肺癌肺轉(zhuǎn)移模型的作用研究
                2.4.3.1.1 二甲雙胍抑制LLC細(xì)胞腋下接種模型中腫瘤細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移
                2.4.3.1.2 二甲雙胍抑制LLC細(xì)胞尾靜脈接種模型中腫瘤細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移
                2.4.3.1.3 二甲雙胍可在體內(nèi)降低腫瘤組織中的M2型巨噬細(xì)胞比例
                2.4.3.1.4 二甲雙胍可在體內(nèi)增加血管的成熟度
            2.4.3.2 二甲雙胍對小鼠乳腺癌4T1原位接種模型的作用研究
                2.4.3.2.1 二甲雙胍抑制小鼠乳腺癌4T1原位接種模型中腫瘤細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移
                2.4.3.2.2 二甲雙胍可減少小鼠乳腺癌組織中的M2型巨噬細(xì)胞
    2.5 討論
第三章 二甲雙胍協(xié)同瑞博西尼發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與儀器
        3.2.1 細(xì)胞株
        3.2.2 實驗動物
        3.2.3 藥物與主要試劑
        3.2.4 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 分離及誘導(dǎo)培養(yǎng)小鼠原代骨髓來源巨噬細(xì)胞
        3.3.3 SRB實驗檢測細(xì)胞增殖
        3.3.4 流式細(xì)胞術(shù)
        3.3.5 實時熒光定量PCR
        3.3.6 動物實驗
        3.3.7 免疫組化
        3.3.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 評價多種小分子抑制劑對巨噬細(xì)胞M2型極化的作用
        3.4.2 瑞博西尼促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型極化
            3.4.2.1 瑞博西尼促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的M2型極化
            3.4.2.2 瑞博西尼促進(jìn)BMDM的M2型極化
        3.4.3 二甲雙胍協(xié)同瑞博西尼發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用
        3.4.4 巨噬細(xì)胞參與二甲雙胍協(xié)同瑞博西尼的抗腫瘤轉(zhuǎn)移過程
    3.5 討論
第四章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
綜述 基于腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的腫瘤治療策略研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果



本文編號：3545731