研究背景:腫瘤相關(guān)巨噬細胞（Tumor-associated macrophage,TAM）是腫瘤微環(huán)境基質(zhì)細胞中重要的組成部分,具有可塑性強和功能多樣的特點。TAM可受腫瘤微環(huán)境影響,被極化為分子特征及生物學功能完全不同的兩大類TAM亞群,即發(fā)生經(jīng)典極化（Classical polarization）的 M1 型 TAM 以及發(fā)生替代極化（Alternative polarization）的M2型TAM,其中M1型TAM發(fā)揮抗腫瘤作用,而M2型TAM則加速了腫瘤的發(fā)生和演進。M2型極化狀態(tài)下的TAM能夠大量合成與釋放抗炎細胞因子、免疫抑制因子和多種可以促進腫瘤細胞發(fā)生、生長、遷移以及血管淋巴管形成的各種細胞因子,從而進一步促進血管的生成和細胞外基質(zhì)分解和重塑并促進腫瘤細胞運動。而且巨噬細胞和腫瘤細胞之間的直接交流會導致腫瘤細胞入侵和轉(zhuǎn)移進入血管。因此,M2型巨噬細胞在促腫瘤轉(zhuǎn)移的微環(huán)境中扮演關(guān)鍵作用,是腫瘤治療的重要靶點。目前靶向腫瘤相關(guān)巨噬細胞的治療研究主要有三個方向,一是通過抑制TAM的增殖、存活和招募減少TAM的數(shù)量;二是干預TAM的M2型極化;三是調(diào)節(jié)TAM的吞噬功能。目前針... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
緒論
第一章 二甲雙胍抑制巨噬細胞M2型極化及其機制
    1.1 引言
    1.2 實驗材料與儀器
        1.2.1 細胞株
        1.2.2 實驗動物
        1.2.3 藥物與主要試劑
        1.2.4 實驗儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 細胞培養(yǎng)
        1.3.2 小鼠原代骨髓來源巨噬細胞的分離及誘導培養(yǎng)
        1.3.3 SRB法檢測細胞增殖
        1.3.4 流式細胞術(shù)
        1.3.5 實時熒光定量PCR
        1.3.6 siRNA轉(zhuǎn)染
        1.3.7 Western Blot法檢測蛋白表達
        1.3.8 統(tǒng)計學分析
    1.4 實驗結(jié)果
        1.4.1 二甲雙胍抑制巨噬細胞M2型極化
            1.4.1.1 二甲雙胍抑制RAW264.7的M2型極化
            1.4.1.2 二甲雙胍抑制BMDM的M2型極化
            1.4.1.3 二甲雙胍抑制THP1的M2型極化
        1.4.2 二甲雙胍不影響巨噬細胞的M1型極化
        1.4.3 二甲雙胍通過激活AMPKα1抑制巨噬細胞M2型極化
    1.5 討論
第二章 二甲雙胍通過抑制巨噬細胞M2型極化發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與儀器
        2.2.1 細胞株
        2.2.2 實驗動物
        2.2.3 藥物與主要試劑
        2.2.4 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 分離及誘導培養(yǎng)小鼠原代骨髄來源巨噬細胞
        2.3.3 條件培養(yǎng)基制備
        2.3.4 SRB實驗檢測細胞增殖
        2.3.5 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡
        2.3.6 Transwell小室遷移實驗
        2.3.7 實時熒光定量PCR
        2.3.8 小鼠肺毛細血管內(nèi)皮細胞分離與純化
        2.3.9 劃痕修復實驗
        2.3.10 管腔形成實驗
        2.3.11 動物實驗
        2.3.12 蘇木素&伊紅染色法
        2.3.13 免疫熒光
        2.3.14 免疫組化
        2.3.15 CCL2分泌水平檢測
        2.3.16 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 二甲雙胍抑制M2型巨噬細胞極化對腫瘤細胞增殖運動能力的影響
        2.4.2 二甲雙胍抑制M2型巨噬細胞極化對內(nèi)皮細胞增殖運動管腔形成能力的影響
        2.4.3 二甲雙胍通過抑制巨噬細胞M2型極化抑制腫瘤轉(zhuǎn)移
            2.4.3.1 二甲雙胍對小鼠Lewis肺癌肺轉(zhuǎn)移模型的作用研究
                2.4.3.1.1 二甲雙胍抑制LLC細胞腋下接種模型中腫瘤細胞的肺轉(zhuǎn)移
                2.4.3.1.2 二甲雙胍抑制LLC細胞尾靜脈接種模型中腫瘤細胞的肺轉(zhuǎn)移
                2.4.3.1.3 二甲雙胍可在體內(nèi)降低腫瘤組織中的M2型巨噬細胞比例
                2.4.3.1.4 二甲雙胍可在體內(nèi)增加血管的成熟度
            2.4.3.2 二甲雙胍對小鼠乳腺癌4T1原位接種模型的作用研究
                2.4.3.2.1 二甲雙胍抑制小鼠乳腺癌4T1原位接種模型中腫瘤細胞的肺轉(zhuǎn)移
                2.4.3.2.2 二甲雙胍可減少小鼠乳腺癌組織中的M2型巨噬細胞
    2.5 討論
第三章 二甲雙胍協(xié)同瑞博西尼發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與儀器
        3.2.1 細胞株
        3.2.2 實驗動物
        3.2.3 藥物與主要試劑
        3.2.4 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)
        3.3.2 分離及誘導培養(yǎng)小鼠原代骨髓來源巨噬細胞
        3.3.3 SRB實驗檢測細胞增殖
        3.3.4 流式細胞術(shù)
        3.3.5 實時熒光定量PCR
        3.3.6 動物實驗
        3.3.7 免疫組化
        3.3.8 統(tǒng)計學分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 評價多種小分子抑制劑對巨噬細胞M2型極化的作用
        3.4.2 瑞博西尼促進巨噬細胞M2型極化
            3.4.2.1 瑞博西尼促進RAW264.7細胞的M2型極化
            3.4.2.2 瑞博西尼促進BMDM的M2型極化
        3.4.3 二甲雙胍協(xié)同瑞博西尼發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用
        3.4.4 巨噬細胞參與二甲雙胍協(xié)同瑞博西尼的抗腫瘤轉(zhuǎn)移過程
    3.5 討論
第四章 總結(jié)與展望
參考文獻
綜述 基于腫瘤相關(guān)巨噬細胞的腫瘤治療策略研究進展
    參考文獻
作者簡歷及在學期間所取得的科研成果



本文編號：3545731