本文關(guān)鍵詞：針對柯薩奇病毒和埃博拉病毒的藥物篩選及活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雖然科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步改變了我們的生存環(huán)境和生存空間,使得我們的生活更加豐富,便捷以及安逸,但全球性流行傳染病卻常常在提醒我們：我們生活在一個(gè)微生物的世界里,微生物(包括病毒,細(xì)菌,真菌等)以驚人的變異速度來適應(yīng)和抵抗藥物及人體免疫防御機(jī)制,導(dǎo)致感染疾病的大規(guī)模爆發(fā)和流行,因此我們必須加快新藥研制的步伐,期望能獲得活性好、毒副作用低的藥物來預(yù)防和治療病原菌感染引起的疾病。小分子化合物是藥物候選物的重要來源,目前新藥的研發(fā)仍然依賴基于靶點(diǎn)特異的篩選模型對大規(guī)模的化合物庫篩選,從中發(fā)現(xiàn)活性化合物。本論文通過建立抗病毒篩選模型,從實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的化合物庫中尋找活性化合物,并對所篩選得到的活性化合物進(jìn)行作用機(jī)制的初步研究。病毒的侵染過程一般可以分為吸附、吸附與進(jìn)入、大分子合成、裝配與釋放5個(gè)階段,從病毒與宿主細(xì)胞表面接觸、釋放核酸進(jìn)入胞漿,到病毒的各個(gè)活性蛋白劫持宿主生物合成系統(tǒng)來完成自身結(jié)構(gòu)蛋白和基因組的復(fù)制,以及最后的組裝成子代病毒釋放,這一系列的過程均可以作為藥物設(shè)計(jì)的靶點(diǎn)。本論文針對兩個(gè)重要病毒柯薩奇病毒(Coxsackie virus)和埃博拉病毒(Ebola virus)進(jìn)行研究,它們都屬于小RNA病毒,并且都對人類健康具有很大的危害性。其中埃博拉病毒包膜蛋白GP (Glycoprotein)在介導(dǎo)埃博拉病毒進(jìn)入受體細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用。柯薩奇病毒B亞型的3C蛋白酶與小RNA病毒蛋白的剪切過程有關(guān),對柯薩奇病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的自我復(fù)制發(fā)揮著非常重要的作用,針對柯薩奇病毒B亞型的3C蛋白酶的抑制劑研究以及針對埃博拉病毒包膜蛋白GP的抑制劑的研究都是抗病毒藥物的重要研究手段。本論文在此基礎(chǔ)上,分別通過基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理進(jìn)行體外的CVB3-3C蛋白酶抑制劑篩選,以及基于報(bào)告基因熒光素酶(luciferase)對攜帶埃博拉囊膜蛋白的假病毒EBOV-GP進(jìn)行了GP抑制劑的篩選。本論文通過高通量篩選,獲得了7個(gè)具有較好活性的CVB3-3C蛋白酶非競爭性可逆抑制劑,以及7個(gè)有顯著活性的EBOV-GP抑制劑,其中CVB3-3C蛋白酶抑制劑的IC50在2.5μM～7.73μM之間,與蘆平曲韋(IC50=1.57μM)達(dá)到同一活性水平,顯示出良好的3C蛋白酶抑制活性。同時(shí)所篩選到的EBOV-GP抑制劑的IC50范圍為0.0257μM～1.071μM,其中化合物F0393-0147對EBOV-GP有特異性抑制效果。通過本論文的研究,我們基于特異高通量篩選模型,分別對CVB3-3C蛋白酶和EBOV-GP進(jìn)行高通量藥物篩選,從實(shí)驗(yàn)室具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的6000個(gè)化合物中篩選出了多個(gè)具有活性的化合物,并且這些化合物的細(xì)胞毒性很低。這些活性化合物的結(jié)構(gòu)與已報(bào)道的小分子藥物屬于不同的類型,提示這些化合物可能有著新的作用機(jī)制。而且根據(jù)構(gòu)效關(guān)系對這些化合物作進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)優(yōu)化之后,有希望獲得活性更好、毒性更低的化合物,對于研發(fā)新型抗病毒藥物提供了新的思路和素材,具有很好的啟示作用。
【關(guān)鍵詞】：心肌炎病毒 3C蛋白酶 埃博拉 GP蛋白 抑制劑 篩選 活性化合物
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R914
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 第一部分 前言11-20
• 1.1 藥物篩選概述11
• 1.2 藥物篩選技術(shù)的發(fā)展歷程11-12
• 1.3 高通量藥物篩選技術(shù)的研究現(xiàn)狀12-14
• 1.3.1 分子水平上的高通量藥物篩選模型13
• 1.3.2 細(xì)胞水平上的高通量藥物篩選模型13-14
• 1.3.3 動(dòng)物水平上的高通量藥物篩選模型14
• 1.4 病毒感染性疾病與抗病毒藥物的研究現(xiàn)狀14-16
• 1.5 抗病毒藥物的發(fā)展趨勢16-18
• 1.5.1 抗腸道病毒藥物的發(fā)展趨勢17
• 1.5.2 抗埃博拉病毒藥物的發(fā)展趨勢17-18
• 1.6 本研究的目的以及意義18-20
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)材料和方法20-31
• 2.1 質(zhì)粒、菌株和細(xì)胞系20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基及溶液的配制20-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法23-31
• 第三部分 柯薩奇病毒3C蛋白酶新型抑制劑的發(fā)現(xiàn)及其生物活性研究31-42
• 3.1 心肌炎病毒的背景介紹31
• 3.2 柯薩奇病毒B3亞型(CVB3)的3C蛋白酶抑制劑31-33
• 3.3 表達(dá)和純化柯薩奇病毒B3亞型(CVB3)的3C蛋白酶33-34
• 3.4 基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理進(jìn)行3C蛋白酶抑制劑體外篩選34-37
• 3.5 對所篩到的活性化合物進(jìn)行細(xì)胞毒性測試37
• 3.6 3C蛋白酶抑制劑的抑制劑類型的研究37-41
• 3.6.1 判斷化合物是否是可逆抑制劑38-39
• 3.6.2 判斷化合物哪種可逆抑制劑39-41
• 3.7 小結(jié)與展望41-42
• 第四部分 埃博拉病毒GP抑制劑的篩選42-51
• 4.1 埃博拉背景介紹42-43
• 4.2 埃博拉假病毒的構(gòu)建43-45
• 4.3 埃博拉GP蛋白抑制劑的篩選45-50
• 4.4 小結(jié)與展望50-51
• 第五部分 總結(jié)與展望51-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 附錄56-59
• 附錄1 CVB3 3C基因序列56
• 附錄2 EBOV2014-C07 GP基因序列56-59
• 致謝59-61
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄61

  本文關(guān)鍵詞：針對柯薩奇病毒和埃博拉病毒的藥物篩選及活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：352747