目的:RNA干擾技術(shù)（RNAi）通過(guò)調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)來(lái)發(fā)揮治療效果,為癌癥治療提供了新的方法。但siRNA的物理化學(xué)特性使其不易透過(guò)細(xì)胞膜而難以發(fā)揮藥效。為此研究人員開(kāi)發(fā)了許多siRNA的遞送體系以期改善其治療效果。但多數(shù)遞送體系尚存在著轉(zhuǎn)染效率低,脫靶效應(yīng)等問(wèn)題。本研究構(gòu)建了雙重酶敏感型抗體靶向的siRNA遞釋體系（siRNA-LMWP-Linker-Antibody）,以期利用穿膜肽的促滲透作用進(jìn)行siRNA的跨膜運(yùn)輸,同時(shí)借助特異性抗體和腫瘤酶實(shí)現(xiàn)siRNA的高效靶向遞送及定點(diǎn)釋放,最終改善siRNA的治療效果。內(nèi)容:本研究以結(jié)腸癌為模型,以腫瘤表面特異性表達(dá)的抗原和內(nèi)肽酶為雙重靶標(biāo),構(gòu)建具有“前藥”特性的siRNA遞釋系統(tǒng)siRNA-LMWP-Linker-Antibody。體系將穿膜肽（LMWP）與siRNA共價(jià)偶聯(lián)構(gòu)建前體藥物,并以此來(lái)促進(jìn)藥物的入胞及胞漿釋放。隨后利用癌細(xì)胞表面特異性過(guò)表達(dá)的Legumain酶的底物肽（Linker）連接該前體藥物與抗體構(gòu)建靶向遞藥體系。當(dāng)體系在抗體介導(dǎo)作用下靶向至結(jié)腸癌細(xì)胞后,癌細(xì)胞表面的Legumain酶作為激活因子切斷其底物肽Lin... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

前體藥物siRNA-S-S-PEG-LMWP機(jī)理圖

8 -80 °C 冰柜 ΜLT1386-3V,Thermo, America9 渦旋機(jī) 齊林貝爾儀器,Vortex-6,中國(guó)10 Milli-Q 超純水儀 Millipore, America11Nano ZS Zetasizer 粒度分析儀Malvern Instruments,Malvern,UK12 生物安全柜 ESCO SVE-4A1,Esco Micro Pte. Ltd, Singapore13 細(xì)胞培養(yǎng)箱 Thermo Fisher Scientific, America14 激光掃描顯微鏡 Olympus FV-1000，Japan1.1.2 前體藥物 siRNA-S-S-PEG-LMWP 的合成純化本節(jié)內(nèi)容主要闡述了前體藥物 siRNA-S-S-PEG-LMWP 的合成方法。采用了三種方法對(duì)前體藥物進(jìn)行了合成（圖 1.2），通過(guò)對(duì)純化方式及 Linker 進(jìn)行篩選同時(shí)對(duì)合成過(guò)程及最終前體藥物的產(chǎn)率進(jìn)行計(jì)算，初步確定合成前體藥物的最佳路線。

圖 1.3 siRNA-S-S-PEG(MAL)-LMWP 的純化層析。（A）通過(guò)肝素柱純化 SH-PEG-LMWP：（1）PEG(MAL)-LMWP；（2）Cys-PEG-LMWP；（3）PDP–PEG-LMWP。（B）通過(guò)離子交換色譜純化siRNA-S-S-PEG(MAL)-LMWP：（1）肝素柱；（2）DEAE 柱。2 前體藥物 siRNA-S-S-PEG(OPSS)-LMWP 的分離純化結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3505139