目的觀察對乙酰氨基酚（APAP）誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中Bruton酪氨酸激酶（Btk）、磷酸化Btk（p-Btk）、核因子κB（NF-κB）、核苷酸結(jié)合寡聚域樣受體蛋白3（NLRP3）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的動(dòng)態(tài)變化,初步探討B(tài)tk在APAP誘導(dǎo)的急性肝損傷中的作用。方法隨機(jī)將54只小鼠分為9組,分別為對照組、APAP 0.5 h組、APAP 1 h組、APAP 3 h組、APAP 6 h組、APAP 12 h組、APAP 24 h組、APAP 36 h組、APAP 48 h組,每組6只。禁食12 h后,單次腹腔注射APAP（300 mg/kg） 0.5、1、3、6、12、24、36、48 h后處死相應(yīng)組別的小鼠。測定各組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）;觀察各組肝臟病理變化;ELSIA測定各組肝組織勻漿中IL-1β和TNF-α;Western blot測定肝組織中Btk、p-Btk、NF-κB及NLRP3表達(dá)。結(jié)果與對照組比較,APAP干預(yù)后的各組血清ALT（F=100.968,P=0.000）、AST（F=73.... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,55(08)北大核心

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不同時(shí)間點(diǎn)小鼠肝臟壞死面積

與對照組比較,APAP干預(yù)后的各組小鼠肝臟Btk(F=441.280,P=0.000)、p-Btk(F=1 323.022,P=0.000)、NF-κB(F=133.125,P=0.000)及NLRP3水平(F=820.095,P=0.000)含量均有變化。正常肝組織中僅有少量的Btk表達(dá),APAP處理組小鼠隨著給藥時(shí)間的延長,Btk及p-Btk的表達(dá)逐漸增多,于24 h表達(dá)最高(P<0.01),后表達(dá)逐漸下降。NF-κB、NLRP3表達(dá)與Btk及p-Btk表達(dá)變化趨勢相一致。見圖3。表2 不同時(shí)間點(diǎn)肝組織IL-1β、TNF-α表達(dá)量 (n=6, x ˉ ±s) 組別 IL-1β(pg/ml) TNF-α(pg/ml) 對照 47.64±4.83 267.64±36.88 APAP 0.5 h 53.33±6.56# 2 96.87±12.88# APAP 1 h 54.05±8.90# 334.63±39.95*# APAP 3 h 61.16±9.01△# 380.42±41.38*# APAP 6 h 64.22±8.39*# 4 18.57±34.35* APAP 12 h 74.64±7.78* 441.26±20.56* APAP 24 h 81.28±7.53* 454.82±32.79* APAP 36 h 74.64±18.92* 389.08±51.33*# APAP 48 h 56.70±7.42# 370.88±20.12*# F值 8.643 20.545 P值 0.000 0.000 與對照組比較:△P<0.05,*P<0.01;與APAP 24 h組比較:#P<0.01

APAP引起的肝損傷病理組織學(xué)主要表現(xiàn)為肝小葉中心性壞死[6-7]。ALT、AST是目前評(píng)價(jià)肝臟損傷程度的常用指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,小鼠單次腹腔注射APAP(300 mg/kg)0.5、1 h,血清ALT、AST及肝臟病理形態(tài)學(xué)與對照組無明顯差異;其余各組血清中ALT、AST水平、3 h后各組肝細(xì)胞壞死面積明顯高于對照組,同時(shí)肝臟HE染色也可見不同程度的肝竇充血。這些生化及病理改變與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[6-7]一致,提示APAP誘導(dǎo)的小鼠肝損傷模型復(fù)制成功。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)APAP(300 mg/kg)單次干預(yù)造成的肝損傷并非完全隨時(shí)間的延長而加重,36 h后肝損傷的程度有所減輕,提示單次APAP造成的小鼠肝損傷存在自身修復(fù)過程。APAP誘導(dǎo)的肝細(xì)胞壞死的發(fā)生與過量服用APAP或肝臟基礎(chǔ)水平還原型谷胱甘肽被耗竭,代謝產(chǎn)生的N-乙酰對苯醌亞胺不能被肝臟還原型谷胱甘肽結(jié)合,造成肝細(xì)胞代謝損傷和氧化應(yīng)激損傷,破壞線粒體膜等有關(guān)[1]。Btk是一種非受體型酪氨酸激酶,表達(dá)于除T淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞的髓系細(xì)胞。Btk通過調(diào)控中性粒細(xì)胞募集和激活參與炎癥過程[5]。當(dāng)細(xì)胞受到細(xì)菌、真菌、病毒及其他危險(xiǎn)信號(hào)的刺激時(shí),Btk以磷酸化的形式活化后可直接調(diào)節(jié)NLRP3或間接調(diào)節(jié)NLRP3等信號(hào)進(jìn)而引起炎性因子的釋放[3-4]。Btk參與調(diào)控多個(gè)重要炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中許多關(guān)鍵的信號(hào)蛋白,包括NF-κB、NFAT、PKC、Pin1、TLRs、caveolin-1 等[8]。近期研究[5]表明在小鼠肝臟缺血再灌注損傷模型中,Btk抑制劑可減輕缺血再灌注引起的肝臟炎性損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:正常小鼠肝組織中僅有少量Btk表達(dá);APAP作用24 h內(nèi),隨著APAP作用時(shí)間的延長,小鼠肝組織中Btk及p-Btk逐漸升高,肝損傷的嚴(yán)重程度與Btk及p-Btk表達(dá)變化趨勢相一致。提示Btk的活化參與了APAP肝損傷病理的形成。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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