三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）是一類(lèi)侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差的惡性腫瘤。然而,由于其對(duì)分子靶向治療和內(nèi)分泌治療不敏感,以蒽環(huán)類(lèi)藥物為主的化療仍然是TNBC的主要治療方法。為了減輕化療毒副作用對(duì)機(jī)體的損傷,膳食補(bǔ)充被建議使用作為新的輔助化療方案,其潛在的分子機(jī)制尚未完全闡明。因此,尋求安全有效、易于獲得、副作用小的輔助化療藥物是三陰性乳腺癌的治療趨勢(shì)。殼寡糖（chitosan oligosaccharides,COS）是一種膳食補(bǔ)充劑,已被大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。但現(xiàn)有體外實(shí)驗(yàn)研究普遍采用的較高劑量,未能充分認(rèn)識(shí)COS的抗腫瘤作用。因此,有必要探究低濃度COS及其與化療藥阿霉素（doxorubicin,DOX）的聯(lián)合給藥對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞模型的干預(yù),以及是否對(duì)阿霉素的抑癌效果產(chǎn)生影響。實(shí)驗(yàn)在高轉(zhuǎn)移特性的三陰性乳腺癌典型細(xì)胞株MDA-MB-231上評(píng)價(jià)了COS與阿霉素聯(lián)用的抗腫瘤活性,進(jìn)而采用轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序技術(shù)（RNA-seq）挖掘分析其潛在分子靶點(diǎn)。主要研究工作及結(jié)果如下:（1）COS組分表征。采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)本實(shí)驗(yàn)采用... 

【文章來(lái)源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 三陰性乳腺癌(TNBC)概述
        1.1.1 TNBC簡(jiǎn)介
        1.1.2 TNBC特性與復(fù)雜性
        1.1.3 TNBC治療方法與趨勢(shì)
    1.2 殼寡糖(COS)概述
        1.2.1 COS概況
        1.2.2 COS抗腫瘤特性
        1.2.3 COS與膳食治療
    1.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)(RNA-seq)概述
        1.3.1 RNA-seq簡(jiǎn)介
        1.3.2 測(cè)序技術(shù)發(fā)展史與比較
        1.3.3 RNA-seq的應(yīng)用
    1.4 立題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容
        1.4.1 立題依據(jù)
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 試劑配制
        2.4.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)檢測(cè)
        2.4.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.4 細(xì)胞生存率檢測(cè)
        2.4.5 細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)
        2.4.6 Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移
        2.4.7 激光共聚焦檢測(cè)阿霉素入核熒光強(qiáng)度
        2.4.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)阿霉素入核熒光強(qiáng)度
        2.4.9 RNA-seq分析方案
        2.4.10 mRNA文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序流程
        2.4.11 RNA-seq分析
        2.4.12 TRIzol法總RNA提取
        2.4.13 q RT-PCR法檢測(cè)差異基因m RNA表達(dá)
        2.4.14 小干擾RNA(si RNA)法沉默差異基因表達(dá)
        2.4.15 免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)關(guān)鍵基因蛋白表達(dá)
    2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 COS組成成分分析
    3.2 COS單獨(dú)給藥對(duì)細(xì)胞生存率影響
    3.3 COS與阿霉素聯(lián)合給藥對(duì)細(xì)胞生存率影響
        3.3.1 阿霉素的半數(shù)抑制濃度(IC50)測(cè)定
        3.3.2 COS預(yù)孵時(shí)間優(yōu)化
        3.3.3 COS濃度優(yōu)化
        3.3.4 COS聚合度優(yōu)化
    3.4 COS聯(lián)合阿霉素抑制MDA-MB-231 細(xì)胞的機(jī)制分析
        3.4.1 COS單獨(dú)作用對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響
        3.4.2 COS預(yù)孵對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
        3.4.3 COS預(yù)孵對(duì)阿霉素入核的影響
    3.5 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果
        3.5.1 基礎(chǔ)分析
        3.5.2 基因表達(dá)量分布
        3.5.3 主成分(PCA)分析
        3.5.4 基因表達(dá)韋恩(Venn)分析
        3.5.5 殼三糖預(yù)孵的時(shí)間序列分析
        3.5.6 殼三糖預(yù)孵調(diào)控的差異基因分析
        3.5.7 殼三糖在聯(lián)合給藥中調(diào)控的差異基因分析
    3.6 差異基因驗(yàn)證
        3.6.1 殼三糖預(yù)孵作用差異基因驗(yàn)證
        3.6.2 殼三糖在聯(lián)合給藥中調(diào)控靶基因功能驗(yàn)證
結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 :作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3487788