為探究生物催化法合成組胺,通過對IPTG濃度、誘導(dǎo)時(shí)間和酶學(xué)性質(zhì)的研究,確定組氨酸脫羧酶誘導(dǎo)表達(dá)條件以及最適反應(yīng)條件.結(jié)果表明:不同IPTG誘導(dǎo)濃度對酶活影響不大;酶活隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加而升高;酶反應(yīng)最適溫度為30℃,pH為6.0;隨著產(chǎn)物濃度增加,酶活降低,具有產(chǎn)物抑制現(xiàn)象;5%底物時(shí)轉(zhuǎn)化率達(dá)到60%,3%底物時(shí)轉(zhuǎn)化率達(dá)到97.7%.可見,該組氨酸脫羧酶有工業(yè)應(yīng)用開發(fā)潛力. 

【文章來源】：杭州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019,18(03)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖２ＩＰＴＧ濃度對酶活的影響Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｏｆＩＰＴＧｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ

當(dāng)ＩＰＴＧ濃度大于０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ時(shí)，酶活隨著ＩＰＴＧ濃度的升高而降低．圖３反映了ＩＰＴＧ誘導(dǎo)時(shí)間對酶活的影響，結(jié)果表明，誘導(dǎo)時(shí)間對ＨＤＣ活力影響顯著，誘導(dǎo)時(shí)間越長，酶活越高．當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)間為２ｈ時(shí)，產(chǎn)率為９％左右；當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)間為１０ｈ時(shí)，產(chǎn)率達(dá)到２９％，誘導(dǎo)時(shí)間為２０ｈ，產(chǎn)率達(dá)到３４％．圖２ＩＰＴＧ濃度對酶活的影響Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｏｆＩＰＴＧｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ圖３ＩＰＴＧ誘導(dǎo)時(shí)間對酶活的影響Ｆｉｇ．３ＥｆｆｅｃｔｏｆＩＰＴＧｉｎｄｕｃｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ２．３ｐＨ和溫度對酶活的影響不同ｐＨ對酶活的影響見圖４Ａ：當(dāng)ｐＨ為６．０時(shí)，組氨酸脫羧酶具有最大的酶活，ｐＨ為５．５時(shí)其酶６７２杭州師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）２０１９年

活略有降低；當(dāng)ｐＨ大于６．０時(shí)，酶活隨著ｐＨ的升高而降低；當(dāng)ｐＨ為８．０時(shí)，其相對酶活為１２．７％．不同溫度對酶活的影響見圖４Ｂ：當(dāng)溫度小于３０℃時(shí)，隨著溫度的上升，ＨＤＣ活力逐漸升高；當(dāng)溫度大于３５℃時(shí)，酶活隨著溫度的升高而逐漸降低．因此反應(yīng)溫度可以選擇３０℃或是３５℃．組氨酸脫羧酶ｐＨ穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖４Ｃ所示．從總體上來看，酶在ｐＨ６．０的條件下最穩(wěn)定，ｐＨ５．５穩(wěn)定性最差．處理時(shí)間為４ｈ時(shí)，由ｐＨ６．０緩沖液處理的組氨酸脫羧酶活性為初始酶活的８０％以上，由ｐＨ６．５緩沖液處理的殘余酶活為７５．０％，由ｐＨ５．５緩沖液處理的酶活為５６．９％．當(dāng)處理時(shí)間為９ｈ時(shí)，ｐＨ５．５和６．５下的酶完全失活，ｐＨ６．０下的酶活降低至２０％左右．組氨酸脫羧酶溫度穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖４Ｄ所示，經(jīng)３個(gè)溫度處理０．５ｈ之后酶活均隨著時(shí)間的增加而降低．２５℃條件下組氨酸脫羧酶穩(wěn)定性最好，處理９ｈ后相對酶活為８６％，而３０和３５℃條件下殘余酶活分別是６０．５％和２８．４％．Ａ：不同ｐＨ對ＨＤＣ活力的影響；Ｂ：不同溫度對ＨＤＣ活力的影響；Ｃ：ＨＤＣ在ｐＨ值５．５，６．０，６．５條件下的穩(wěn)定性；Ｄ：ＨＤＣ在溫度為２５，３０，３５℃條件下的穩(wěn)定性．圖４ｐＨ和溫度對酶活的影響Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ２．４底物濃度對酶活的影響添加不同底物濃度對

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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