目的:1.觀察DAIa2GIP拮抗IL-1β誘發(fā)軟骨細胞線粒體凋亡的效應(yīng);2.探討DAIa2GIP拮抗軟骨細胞損傷的分子機制;3.為骨關(guān)節(jié)炎藥物治療提供新的思路,尋找新的突破,同時為骨關(guān)節(jié)炎的轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究提供實驗依據(jù)。方法:本實驗選取SD大鼠出生7日幼鼠的肋軟骨細胞,仔細分離消化后用含1%雙抗、10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng),制作細胞爬片利用免疫組化法進行細胞鑒定,選取培養(yǎng)的第三代細胞進行實驗。將細胞在上述培養(yǎng)基基礎(chǔ)上不同處理后分為6組,具體為:（1）正常對照組:原培養(yǎng)基基礎(chǔ)上不添加其他藥物;（2）IL-1β誘導(dǎo)組:加入IL-1β（10 ng/m L）;（3）IL-1β+DAla2GIP孵育組:加入IL-1β（10 ng/m L）、DAla2GIP（100p M）;（4）IL-1β+DAla2GIP+pro3GIP（GIPR拮抗劑）孵育組:加入IL-1β（10 ng/m L）、DAla2GIP（100p M）、pro3 GIP（100p M）;（5）DAla2GIP孵育組:加入DAla2GIP（100p M）;（6）pro3GIP孵育組:加入pro3GIP（100p M）。在相... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫組織化學染色熒光顯微鏡鑒定軟骨細胞ACollagenⅡ熒光染色圖片，放大倍數(shù)100X；

山西醫(yī)科大學（博）碩士學位論文9軟骨細胞凋亡率：IL-1β+DAla2GIP孵育組（1.05%±0.05%）明顯低于IL-1β誘導(dǎo)組（3.85%±0.55%）（P<0.01）；IL-1β誘導(dǎo)組與IL-1β+DAla2GIP+pro3GIP孵育組（3.25%±0.25%）無明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05），且兩組均高于正常對照組（0.95%±0.15%）（P<0.01）；正常對照組、DAla2GIP孵育組（1.7%±0.4%）及pro3GIP孵育組（1.1%±0.4%）均無明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05）。圖2：A，各組細胞流式細胞學結(jié)果，橫坐標表示Annexin-VFITC染色凋亡細胞百分比，縱坐標表示線粒體膜電位測試活細胞膜電位保持度；；B圖和C圖分別是線粒體膜電位及Annexin-VFITC檢測的統(tǒng)計直方圖，**P<0.01vsControl組，##P<0.01vsIL-1β組，△△P<0.01vsIL-1β+DAla2GIP組。2.2.1熒光顯微鏡如圖3為各處理組細胞英冠顯微鏡下觀察。Mito-TrackerRedCMXRos染液為紅色熒光，標記保持線粒體膜電位的活細胞，且隨著線粒體膜電位的減弱到喪失紅色熒

2.5.2 測 Bcl-2 含量結(jié)果（以相對灰度值進行比較）如圖 5 所示 IL-1β+DAla2GIP 孵育組（109.87%±14.64）較 IL-1β誘導(dǎo)組（60.18%±6.74%），明顯增高（P<0.01）；IL-1β誘導(dǎo)組與 IL-1β+DAla2GIP+ pro3GIP 孵育組（60.88%±8.80）無明顯差異（P>0.05），且兩組相比較均低于正常對照組（100%±9.09%）（P<0.01）；正常對照組、DAla2GIP 孵育組（96.32%±8.35%）及 pro3GIP孵育組(97.82%±7.57%)三組之間均無明顯差異（P>0.05）。

【參考文獻】：
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本文編號：3415278