目的:1.觀察DAIa2GIP拮抗IL-1β誘發(fā)軟骨細(xì)胞線粒體凋亡的效應(yīng);2.探討DAIa2GIP拮抗軟骨細(xì)胞損傷的分子機(jī)制;3.為骨關(guān)節(jié)炎藥物治療提供新的思路,尋找新的突破,同時(shí)為骨關(guān)節(jié)炎的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:本實(shí)驗(yàn)選取SD大鼠出生7日幼鼠的肋軟骨細(xì)胞,仔細(xì)分離消化后用含1%雙抗、10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),制作細(xì)胞爬片利用免疫組化法進(jìn)行細(xì)胞鑒定,選取培養(yǎng)的第三代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞在上述培養(yǎng)基基礎(chǔ)上不同處理后分為6組,具體為:（1）正常對(duì)照組:原培養(yǎng)基基礎(chǔ)上不添加其他藥物;（2）IL-1β誘導(dǎo)組:加入IL-1β（10 ng/m L）;（3）IL-1β+DAla2GIP孵育組:加入IL-1β（10 ng/m L）、DAla2GIP（100p M）;（4）IL-1β+DAla2GIP+pro3GIP（GIPR拮抗劑）孵育組:加入IL-1β（10 ng/m L）、DAla2GIP（100p M）、pro3 GIP（100p M）;（5）DAla2GIP孵育組:加入DAla2GIP（100p M）;（6）pro3GIP孵育組:加入pro3GIP（100p M）。在相... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫組織化學(xué)染色熒光顯微鏡鑒定軟骨細(xì)胞ACollagenⅡ熒光染色圖片，放大倍數(shù)100X；

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文9軟骨細(xì)胞凋亡率：IL-1β+DAla2GIP孵育組（1.05%±0.05%）明顯低于IL-1β誘導(dǎo)組（3.85%±0.55%）（P<0.01）；IL-1β誘導(dǎo)組與IL-1β+DAla2GIP+pro3GIP孵育組（3.25%±0.25%）無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），且兩組均高于正常對(duì)照組（0.95%±0.15%）（P<0.01）；正常對(duì)照組、DAla2GIP孵育組（1.7%±0.4%）及pro3GIP孵育組（1.1%±0.4%）均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。圖2：A，各組細(xì)胞流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果，橫坐標(biāo)表示Annexin-VFITC染色凋亡細(xì)胞百分比，縱坐標(biāo)表示線粒體膜電位測(cè)試活細(xì)胞膜電位保持度；；B圖和C圖分別是線粒體膜電位及Annexin-VFITC檢測(cè)的統(tǒng)計(jì)直方圖，**P<0.01vsControl組，##P<0.01vsIL-1β組，△△P<0.01vsIL-1β+DAla2GIP組。2.2.1熒光顯微鏡如圖3為各處理組細(xì)胞英冠顯微鏡下觀察。Mito-TrackerRedCMXRos染液為紅色熒光，標(biāo)記保持線粒體膜電位的活細(xì)胞，且隨著線粒體膜電位的減弱到喪失紅色熒

2.5.2 測(cè) Bcl-2 含量結(jié)果（以相對(duì)灰度值進(jìn)行比較）如圖 5 所示 IL-1β+DAla2GIP 孵育組（109.87%±14.64）較 IL-1β誘導(dǎo)組（60.18%±6.74%），明顯增高（P<0.01）；IL-1β誘導(dǎo)組與 IL-1β+DAla2GIP+ pro3GIP 孵育組（60.88%±8.80）無(wú)明顯差異（P>0.05），且兩組相比較均低于正常對(duì)照組（100%±9.09%）（P<0.01）；正常對(duì)照組、DAla2GIP 孵育組（96.32%±8.35%）及 pro3GIP孵育組(97.82%±7.57%)三組之間均無(wú)明顯差異（P>0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Kinsenoside attenuates osteoarthritis by repolarizing macrophages through inactivating NF-κB/MAPK signaling and protecting chondrocytes[J]. Feng Zhou,Jingtian Mei,Xiuguo Han,Hanjun Li,Shengbing Yang,Minqi Wang,Linyang Chu,Han Qiao,Tingting Tang.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)
[2]p53-Bcl-2/Bax凋亡信號(hào)通路變化在自發(fā)性高血壓大鼠左心室重構(gòu)進(jìn)程中作用（英文）[J]. 孫瑞敏,俞雪,付舒,吳雨婷,岳云,李葉麗,楊丹莉.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2019(02)
[3]中國(guó)膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)狀[J]. 辛麗維.  雙足與保健. 2018(20)
[4]Notch信號(hào)通路在膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡中的作用研究[J]. 吳紹軍,劉俊才,左銀龍,李忠.  華西醫(yī)學(xué). 2018(09)
[5]骨關(guān)節(jié)炎與MAPK信號(hào)通路關(guān)系的研究概況[J]. 王濤,殷紅,廖江龍,何云鵬,李金磊,艾元亮,許燕飛,劉維統(tǒng),楊光,溫輝,楊景帆.  中國(guó)民族民間醫(yī)藥. 2017(19)
[6]基于腸促胰素治療對(duì)骨代謝的影響[J]. 項(xiàng)守奎,華飛,章振林.  中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志. 2017(04)
[7]糖尿病與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)性的Meta分析[J]. 王華軍,陳均源,羅斯敏,桂濤,桑園,吳文銳,劉寧,查振剛.  中國(guó)矯形外科雜志. 2017(11)
[8]腸促胰素與骨代謝[J]. 余潔,許嶺翎.  中華糖尿病雜志. 2017 (03)
[9]p38 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在骨關(guān)節(jié)炎中的相關(guān)研究[J]. 林學(xué)義,蘇友新.  福建中醫(yī)藥. 2013(01)
[10]TGF-β超家族在軟骨發(fā)生、發(fā)育和維持中的作用[J]. 楊冠,楊曉.  遺傳. 2008(08)



本文編號(hào)：3415278