體外構(gòu)建三維細(xì)胞培養(yǎng)支架及其在腫瘤化療藥物篩選中的應(yīng)用研究
發(fā)布時(shí)間：2021-09-28 12:58
【目的】以天然絲素蛋白（SF）和殼聚糖（CS）為主要原料,采用真空冷凍干燥的方法制備經(jīng)不同生物交聯(lián)劑交聯(lián)的兩種SF/CS三維細(xì)胞培養(yǎng)支架,分別檢測(cè)其理化性質(zhì)及細(xì)胞相容性試驗(yàn),篩選出適宜腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的三維培養(yǎng)支架。并以此為材料進(jìn)行腫瘤化療藥物敏感性試驗(yàn),為腫瘤化療藥物的體外敏感性篩選提供新的技術(shù)平臺(tái)�！痉椒ā康谝徊糠�:1.將一定量的清潔蠶繭經(jīng)過(guò)脫膠,干燥,溶解,過(guò)濾,透析處理后得到2%3%的絲素蛋白溶液,將其與3%的殼聚糖溶液以1:1比例均勻混合,加入不同的生物交聯(lián)劑即三聚磷酸鈉（TPP）或碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺（EDC/NHS）通過(guò)真空冷凍干燥獲得兩種三維細(xì)胞培養(yǎng)支架即EDC交聯(lián)的SF/CS三維支架和TPP交聯(lián)的SF/CS三維細(xì)支架（EDC組、TPP組）。2.用真空冷凍干燥方法制備純絲素蛋白（純SF組）、純殼聚糖支架材料即（純CS組）。3.通過(guò)光鏡、掃描電鏡（SEM）、HE染色觀察三維支架的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。4.利用傅里葉變換衰減全反射紅外光譜法（ART-FTIR）分析其官能團(tuán)組成。5.利用X射線衍射（XRD）分析其基本組成。6.檢測(cè)EDC組、TPP組三維支架的吸...
【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
絲素蛋白/殼聚糖三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的構(gòu)建示意圖a.絲素蛋白提取過(guò)程；b.絲素蛋白/殼聚糖三維支架制備流程
2.不同交聯(lián)劑對(duì)三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的形態(tài)學(xué)影響2.1 肉眼觀察三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的形態(tài)根據(jù)以上方法制備不同規(guī)格的三維支架材料（如圖2.1 a），首先從潔凈的蠶繭中提取獲得2%～3%絲素蛋白溶液注入不同模具（24孔板和96孔板）中，經(jīng)過(guò)梯度干燥后采用真空冷凍干燥方法制備出純絲素蛋白三維支架（純SF組）；將配制3%殼聚糖溶液采用相同的方法制備出純殼聚糖三維支架（純CS組）；應(yīng)用兩種不同的生物交聯(lián)劑（EDC、TPP）分別制備出EDC交聯(lián)的SF/CS三維支架材料和TPP交聯(lián)的SF/CS三維支架材料即EDC組和TPP組。肉眼觀察結(jié)果，如圖2.1 b 所示，純SF組支架材料外觀呈亮白色、質(zhì)地較脆；純CS組外觀呈淡黃色，質(zhì)地較軟；EDC組和TPP組三維支架材料外觀呈乳白色，質(zhì)地松軟，且可見(jiàn)微孔類似海綿狀結(jié)構(gòu)。圖 2.1 三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的光鏡圖 a.采用不同模具（24 孔板和 96 孔板）制備的三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的光鏡圖；b.四組三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的形態(tài)學(xué)比較，從左到右依次是純 SF 組、純 CS 組、EDC 組、TPP 組。2.2 掃描電子顯微鏡觀察三維支架材料的形態(tài)掃描電子顯微鏡（SEM）是介于光學(xué)顯微鏡和投射電鏡之間的一種微觀形態(tài)面貌的觀察方式
此比本課題采用SEM觀察由以上技術(shù)方法構(gòu)建的三維支架材料的內(nèi)部形態(tài)。結(jié)果顯示：由絲素蛋白和殼聚糖兩種生物材料交聯(lián)的三維支架材料比單一絲素蛋白或單一殼聚糖構(gòu)建的三維支架材料更具體適合細(xì)胞生長(zhǎng)所需的立體空間，如圖2.2所示，TPP組和EDC組相比于純SF組、純CS組，前兩者能形成微小的空隙結(jié)構(gòu)，這些微孔結(jié)構(gòu)為細(xì)胞生長(zhǎng)的粘附、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸以及代謝廢物的排泄提供有利的可能。而純絲素蛋白三維支架SEM圖呈現(xiàn)片狀、卷曲狀，純殼聚糖三維支架SEM圖空隙結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)不明顯且空隙間連通性較差。圖 2.2 掃描電子顯微鏡觀察三維支架的內(nèi)部構(gòu)造。a.純絲素蛋白支架 b.純殼聚糖支架 c.經(jīng) TPP 交聯(lián)的絲素蛋白/殼聚糖三維支架 d.經(jīng) EDC 交聯(lián)的絲素蛋白/殼聚糖三維支架。2.3 病理學(xué)HE染色觀察三維支架材料的形態(tài)將絲素蛋白/殼聚糖三維支架材料進(jìn)行石蠟包埋（由于純絲素蛋白支架和純殼聚糖支架材料不耐高溫且性質(zhì)不穩(wěn)定不宜做石蠟包埋故選取 TPP、EDC 交聯(lián)的支架材料進(jìn)行石蠟包埋）切片染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò) HE 染色可見(jiàn)絲素蛋白殼聚糖三維
本文編號(hào)：3411944
【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
絲素蛋白/殼聚糖三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的構(gòu)建示意圖a.絲素蛋白提取過(guò)程；b.絲素蛋白/殼聚糖三維支架制備流程
2.不同交聯(lián)劑對(duì)三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的形態(tài)學(xué)影響2.1 肉眼觀察三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的形態(tài)根據(jù)以上方法制備不同規(guī)格的三維支架材料（如圖2.1 a），首先從潔凈的蠶繭中提取獲得2%～3%絲素蛋白溶液注入不同模具（24孔板和96孔板）中，經(jīng)過(guò)梯度干燥后采用真空冷凍干燥方法制備出純絲素蛋白三維支架（純SF組）；將配制3%殼聚糖溶液采用相同的方法制備出純殼聚糖三維支架（純CS組）；應(yīng)用兩種不同的生物交聯(lián)劑（EDC、TPP）分別制備出EDC交聯(lián)的SF/CS三維支架材料和TPP交聯(lián)的SF/CS三維支架材料即EDC組和TPP組。肉眼觀察結(jié)果，如圖2.1 b 所示，純SF組支架材料外觀呈亮白色、質(zhì)地較脆；純CS組外觀呈淡黃色，質(zhì)地較軟；EDC組和TPP組三維支架材料外觀呈乳白色，質(zhì)地松軟，且可見(jiàn)微孔類似海綿狀結(jié)構(gòu)。圖 2.1 三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的光鏡圖 a.采用不同模具（24 孔板和 96 孔板）制備的三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的光鏡圖；b.四組三維細(xì)胞培養(yǎng)支架的形態(tài)學(xué)比較，從左到右依次是純 SF 組、純 CS 組、EDC 組、TPP 組。2.2 掃描電子顯微鏡觀察三維支架材料的形態(tài)掃描電子顯微鏡（SEM）是介于光學(xué)顯微鏡和投射電鏡之間的一種微觀形態(tài)面貌的觀察方式
此比本課題采用SEM觀察由以上技術(shù)方法構(gòu)建的三維支架材料的內(nèi)部形態(tài)。結(jié)果顯示：由絲素蛋白和殼聚糖兩種生物材料交聯(lián)的三維支架材料比單一絲素蛋白或單一殼聚糖構(gòu)建的三維支架材料更具體適合細(xì)胞生長(zhǎng)所需的立體空間，如圖2.2所示，TPP組和EDC組相比于純SF組、純CS組，前兩者能形成微小的空隙結(jié)構(gòu)，這些微孔結(jié)構(gòu)為細(xì)胞生長(zhǎng)的粘附、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸以及代謝廢物的排泄提供有利的可能。而純絲素蛋白三維支架SEM圖呈現(xiàn)片狀、卷曲狀，純殼聚糖三維支架SEM圖空隙結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)不明顯且空隙間連通性較差。圖 2.2 掃描電子顯微鏡觀察三維支架的內(nèi)部構(gòu)造。a.純絲素蛋白支架 b.純殼聚糖支架 c.經(jīng) TPP 交聯(lián)的絲素蛋白/殼聚糖三維支架 d.經(jīng) EDC 交聯(lián)的絲素蛋白/殼聚糖三維支架。2.3 病理學(xué)HE染色觀察三維支架材料的形態(tài)將絲素蛋白/殼聚糖三維支架材料進(jìn)行石蠟包埋（由于純絲素蛋白支架和純殼聚糖支架材料不耐高溫且性質(zhì)不穩(wěn)定不宜做石蠟包埋故選取 TPP、EDC 交聯(lián)的支架材料進(jìn)行石蠟包埋）切片染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò) HE 染色可見(jiàn)絲素蛋白殼聚糖三維
本文編號(hào)：3411944
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