目的探討體積調(diào)節(jié)性氯離子通道（volume regulated anion channel, VRAC）阻滯劑NPPB（5-nitro-2-3-phenylpropylamino benzoic acid）對低滲狀態(tài)下小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響及機(jī)制。方法采用小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2細(xì)胞,分為對照組、低滲組、低滲+NPPB干預(yù)組,低滲+U0126組,通過LDH試劑盒檢測NPPB對BV2細(xì)胞的毒性作用;采用免疫熒光技術(shù)和FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽染色檢測BV2細(xì)胞形態(tài)變化及細(xì)胞面積;western blot檢測BV2細(xì)胞MAPK信號通路的變化。結(jié)果 50μmol和100μmol的NPPB對BV2細(xì)胞無明顯毒性作用。與對照組比較,低滲干預(yù)后BV2細(xì)胞迅速由靜息狀態(tài)下的分支狀轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨陌⒚装蜖?IBA1表達(dá)顯著增加,細(xì)胞面積顯著增大;NPPB顯著逆轉(zhuǎn)低滲條件下BV2細(xì)胞形態(tài)變化,減少IBA1表達(dá)及細(xì)胞面積（P<0.05）;與對照組比較,低滲干預(yù)顯著增加p-Erk蛋白表達(dá)（P<0.05）,而Erk、p-Jnk及p-p38蛋白表達(dá)水平無明顯差異（P>0.05）,NPPB顯著降低BV2細(xì)胞p-E... 

【文章來源】：卒中與神經(jīng)疾病. 2020,27(03)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

不同水平NPPB對BV2細(xì)胞毒性的影響

VRAC參與調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化過程、細(xì)胞增殖、趨化遷移、炎性分泌、吞噬過程等[6-10],然而目前研究仍不清楚VRAC如何調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)改變、體積變化及其機(jī)制。正常生理情況下小膠質(zhì)細(xì)胞為靜息狀態(tài),其形態(tài)特點(diǎn)為分支狀,且低表達(dá)免疫分子。中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損后小膠質(zhì)細(xì)胞被激活為成熟的免疫活性細(xì)胞。激活的小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變,由分支狀變成阿米巴狀, 這種形態(tài)變化有助于小膠質(zhì)細(xì)胞入侵病原體和向受損傷部位的遷移[12]。BV2細(xì)胞高度純化,具備原代小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、表型及各項生理特點(diǎn),且研究報道BV2細(xì)胞培養(yǎng)基滲透壓降低20%即可激活VRAC,因此本研究采用低滲培養(yǎng)基干預(yù)BV2細(xì)胞模擬缺血后腦水腫病理狀態(tài)。Ducharme等研究發(fā)現(xiàn),VRAC激活可促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞由分支狀向阿米巴狀轉(zhuǎn)化[6]。Han等研究報道,VRAC抑制劑DCPIB可顯著抑制小膠質(zhì)細(xì)胞增殖、遷移及炎性分泌[13]。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)VRAC被NPPB阻滯后可逆轉(zhuǎn)BV2細(xì)胞的形態(tài)改變,降低IBA1的表達(dá),減少細(xì)胞面積,提示VRAC可能參與了低滲誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞的激活過程。圖3 NPPB對低滲條件下BV2細(xì)胞MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響

NPPB對低滲條件下BV2細(xì)胞MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響


本文編號：3410780