氘代替代物結(jié)合UPLC-MS/MS同步檢測去卵巢大鼠血漿中22種內(nèi)源性大麻素
發(fā)布時間：2021-09-23 19:37
該文旨在建立一種超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）同步檢測去卵巢大鼠血漿中22種內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)的新方法。首先血漿樣品經(jīng)固相小柱（SPE柱）萃取,然后利用UPLC-MS/MS進(jìn)行檢測。采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱,以0.1%乙酸溶液為流動相A,乙腈-異丙醇（9∶1）溶液為流動相B,進(jìn)行梯度洗脫,采用正離子多反應(yīng)離子監(jiān)測模式,以氘代試劑作為對照品的替代物計算回收率,同步定量22種內(nèi)源性大麻素。其中,22種內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99,定量限（LOQs）為0.089 61.965 2 nmol·L-1;5個氘代替代物的相對回收率為11.40%129.9%;重復(fù)性考察結(jié)果顯示,RSD均小于8.0%。所建立的方法,可以用于去卵巢大鼠血漿樣品中PGF2αEA,AEA等多種內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)的定性與定量分析,驗證了該方法的可行性及實用性�？傊�,該方法靈敏度高、重復(fù)性好、實用性強(qiáng),可以用于大鼠血漿樣品脂質(zhì)代謝組學(xué)研究。
【文章來源】：中國中藥雜志. 2016,41(21)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-AG)的化學(xué)結(jié)構(gòu)
2016年11月第41卷第21期Vol.41，No.21November，2016圖222種內(nèi)源性大麻素、5種氘代替代物及1種內(nèi)標(biāo)的提取離子色譜圖Fig.2MＲMchromatogramsofthe22eCBs，5deuteratedsurrogatescompoundsand1IS之比來考察回收率，結(jié)果顯示，除d8-NA-Gly與d4-PEA回收率較低外，其他氘代替代物回收率都在80%以上，結(jié)果見表2。3.4方法的應(yīng)用用上述方法定性定量分析了去卵巢組、假手術(shù)組、陽性給藥組、七寶美髯方給藥組(低、中、高劑量組)大鼠血漿中的內(nèi)源性大麻素類代謝產(chǎn)物。各組中22種內(nèi)源性大麻素類的含量結(jié)果見圖3。在對內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)定量分析的基礎(chǔ)上，采用SIMCA-P12.0軟件，對所測樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析(PCA)與偏最小二乘判別(PLS-DA)分析，見圖4。試驗結(jié)果表明，共定性檢測到PGF2aEA，PGF2a1G，αLEA，DHEA，AEA，LEA，2-AG，diho-moGLAEA，1-AG，2-LG，1-LG，PEA，DEA，OEA，NO-Gly，1-OG，SEA等17種內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)，其中對PGF2aEA，AEA，LEA，1-AG，2-LG，1-LG，OEA，1-OG，SEA等8種物質(zhì)進(jìn)行了定量分析。其中1-OG，2-LG，1-LG含量相對較高;且去卵巢組內(nèi)源性大麻素明顯高于其他組。PCA分析與PLS-DA判別分析中可知，去卵巢組與假手術(shù)組明顯聚為2類，經(jīng)七寶美髯方給藥治療后，各組中內(nèi)源性大麻素的成分有不同變化，且給藥劑量越高，越接近陽性給藥組與假手術(shù)組，這些結(jié)果表明七寶美髯方具有雌激素樣作用，能改善脂質(zhì)代謝，降低血漿中內(nèi)源性大麻素的含量。·4026·
?鞍字食?淀法又叫液液萃取法，其優(yōu)點是操作簡單、快速，缺點是在使用有機(jī)溶劑沉淀血漿中蛋白質(zhì)的同時，部分待測物會包裹其中，與蛋白發(fā)生共沉淀，造成待測物的損失。固相萃取法具有回收率高、除雜效果好等優(yōu)點，不足的是操作相對復(fù)雜，而且成本較高。試驗比較了利用乙腈、甲醇等作為萃取劑的蛋白質(zhì)沉淀法和固相萃取法，結(jié)果表明固相萃取法對極性較大的內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)(如DHEA，AEA，LEA)有較高的萃取率，而經(jīng)乙腈和甲醇處理后的樣品中，這3種物質(zhì)損失較為嚴(yán)重。綜合考慮，選擇固相萃取進(jìn)行樣品前處理的方法。圖3各組中9種內(nèi)源性大麻素類的含量(x珋±s，n=18)Fig.3Thecontentof9eCBsineachgroup(x珋±s，n=18)·4027·
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)對心血管功能的調(diào)節(jié)作用[J]. 周廣海,金松南,文今福. 中國藥理學(xué)通報. 2011(07)
本文編號：3406292
【文章來源】：中國中藥雜志. 2016,41(21)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-AG)的化學(xué)結(jié)構(gòu)
2016年11月第41卷第21期Vol.41，No.21November，2016圖222種內(nèi)源性大麻素、5種氘代替代物及1種內(nèi)標(biāo)的提取離子色譜圖Fig.2MＲMchromatogramsofthe22eCBs，5deuteratedsurrogatescompoundsand1IS之比來考察回收率，結(jié)果顯示，除d8-NA-Gly與d4-PEA回收率較低外，其他氘代替代物回收率都在80%以上，結(jié)果見表2。3.4方法的應(yīng)用用上述方法定性定量分析了去卵巢組、假手術(shù)組、陽性給藥組、七寶美髯方給藥組(低、中、高劑量組)大鼠血漿中的內(nèi)源性大麻素類代謝產(chǎn)物。各組中22種內(nèi)源性大麻素類的含量結(jié)果見圖3。在對內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)定量分析的基礎(chǔ)上，采用SIMCA-P12.0軟件，對所測樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析(PCA)與偏最小二乘判別(PLS-DA)分析，見圖4。試驗結(jié)果表明，共定性檢測到PGF2aEA，PGF2a1G，αLEA，DHEA，AEA，LEA，2-AG，diho-moGLAEA，1-AG，2-LG，1-LG，PEA，DEA，OEA，NO-Gly，1-OG，SEA等17種內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)，其中對PGF2aEA，AEA，LEA，1-AG，2-LG，1-LG，OEA，1-OG，SEA等8種物質(zhì)進(jìn)行了定量分析。其中1-OG，2-LG，1-LG含量相對較高;且去卵巢組內(nèi)源性大麻素明顯高于其他組。PCA分析與PLS-DA判別分析中可知，去卵巢組與假手術(shù)組明顯聚為2類，經(jīng)七寶美髯方給藥治療后，各組中內(nèi)源性大麻素的成分有不同變化，且給藥劑量越高，越接近陽性給藥組與假手術(shù)組，這些結(jié)果表明七寶美髯方具有雌激素樣作用，能改善脂質(zhì)代謝，降低血漿中內(nèi)源性大麻素的含量。·4026·
?鞍字食?淀法又叫液液萃取法，其優(yōu)點是操作簡單、快速，缺點是在使用有機(jī)溶劑沉淀血漿中蛋白質(zhì)的同時，部分待測物會包裹其中，與蛋白發(fā)生共沉淀，造成待測物的損失。固相萃取法具有回收率高、除雜效果好等優(yōu)點，不足的是操作相對復(fù)雜，而且成本較高。試驗比較了利用乙腈、甲醇等作為萃取劑的蛋白質(zhì)沉淀法和固相萃取法，結(jié)果表明固相萃取法對極性較大的內(nèi)源性大麻素類物質(zhì)(如DHEA，AEA，LEA)有較高的萃取率，而經(jīng)乙腈和甲醇處理后的樣品中，這3種物質(zhì)損失較為嚴(yán)重。綜合考慮，選擇固相萃取進(jìn)行樣品前處理的方法。圖3各組中9種內(nèi)源性大麻素類的含量(x珋±s，n=18)Fig.3Thecontentof9eCBsineachgroup(x珋±s，n=18)·4027·
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)對心血管功能的調(diào)節(jié)作用[J]. 周廣海,金松南,文今福. 中國藥理學(xué)通報. 2011(07)
本文編號：3406292
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