目的建立一種LC-MS/MS法,測(cè)定Beagle犬血漿中可樂(lè)定的質(zhì)量濃度,從而對(duì)鹽酸可樂(lè)定緩釋片在犬體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)行為進(jìn)行研究。方法采用液-液萃取法制備血漿樣品;色譜柱:Luna C₁₈柱,采用梯度洗脫方式,流動(dòng)相:A為甲醇（含體積分?jǐn)?shù)為0.3%的甲酸溶液）,B為5 mmol·L^-1醋酸銨緩沖溶液（含體積分?jǐn)?shù)為0.3%的甲酸溶液）;采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式,測(cè)定Beagle犬口服給予鹽酸可樂(lè)定緩釋片后血漿中可樂(lè)定的質(zhì)量濃度。結(jié)果 Beagle犬血漿中可樂(lè)定的質(zhì)量濃度在25¹ 000 ng·L^-1內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)r=0.998 6;日內(nèi)和日間精密度不大于13.2%;犬血漿樣品中可樂(lè)定的提取回收率在76.0%⁸2.3%內(nèi),基質(zhì)效應(yīng)在100.3%¹12.0%內(nèi)。結(jié)論該方法適合于犬體內(nèi)可樂(lè)定的藥物動(dòng)力學(xué)的研究。 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017,34(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

可樂(lè)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

質(zhì)??%，流速:0.2mL·min－1，進(jìn)樣量:10μL。質(zhì)譜條件:離子源為T(mén)IS源，源電壓:4000V，霧化氣:N2(275.8kPa)，輔助加熱氣:N2(275.8kPa)，氣簾氣:N2(206.9kPa)，碰撞氣:N2(69.0kPa)，霧化溫度:550℃，掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiplereactionmonitoring，MＲM)，檢測(cè)方式:正離子檢測(cè)，檢測(cè)離子:m/z230.1→m/z44.1(可樂(lè)定)、m/z233.2→m/z174.2(美樂(lè)托寧，內(nèi)標(biāo))，可樂(lè)定及美樂(lè)托寧的二級(jí)全掃描質(zhì)譜圖見(jiàn)2A和2B。Fig．2Fullscanproduction［M+H］+massspectraofclonidine(A)andmelatonin(B，IS)圖2可樂(lè)定(A)和內(nèi)標(biāo)美樂(lè)托寧(B)［M+H］+的產(chǎn)物離子全掃描質(zhì)譜圖2.2溶液的制備2.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液與質(zhì)量控制溶液精密稱(chēng)取鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品11.6mg(相當(dāng)于可樂(lè)定10.0mg)于10mL量瓶中，加入甲醇，溶解、定容并搖勻，制成質(zhì)量濃度為1.00g·L－1的儲(chǔ)備液，再用甲醇將儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋至質(zhì)量濃度分別為1.25、2.50、6.25、12.5、25.0、50.0μg·L－1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。另精密稱(chēng)取鹽酸可樂(lè)定標(biāo)準(zhǔn)品11.6mg(相當(dāng)于可樂(lè)定10.0mg)于10mL量瓶中，加入甲醇，溶解、定容并搖勻，制成質(zhì)量濃度為1.00g·L－1的儲(chǔ)備液，再用甲醇將儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋至質(zhì)量濃度分別為1.25、3.00、10.0、40.0μg·L－1的質(zhì)量控制(qualitycontrol，QC)溶液。2.2.2內(nèi)標(biāo)溶液精密稱(chēng)取美樂(lè)托寧原料藥10.0mg于10mL量瓶中，加入甲醇，溶解、定容并搖勻，制成質(zhì)量濃度為1.00g·L－1的儲(chǔ)備液I。精密吸取儲(chǔ)備液I0.1mL至20mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，得5.00mg·L－1的儲(chǔ)備液II。精密吸取儲(chǔ)備液II0.1mL至20mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，得25.0μg·L－1的美樂(lè)托寧內(nèi)標(biāo)溶液。2.2.3醋酸銨溶液稱(chēng)取醋酸銨3.08g，加水400mL溶解，制成?

1mol·L－1碳酸鈉溶液100μL、乙酸乙酯2mL，渦旋1min，振搖10min，離心(4000r·min－1)10min，取上清液于40℃空氣流下吹干，殘?jiān)苡?00μL甲醇－5mmol·L－1醋酸銨緩沖溶液(體積比為5∶95)，渦旋1min，取10μL上清液進(jìn)行LC-MS/MS分析。2.4方法學(xué)的確證2.4.1方法的選擇性取6種空白Beagle犬血漿，各500μL，加入到不同的10mL玻璃管中，除以10μL甲醇代替內(nèi)標(biāo)溶液外，其余按“2.3”條操作，分析獲得的色譜圖見(jiàn)圖3A。取空白Beagle犬血漿500μL，加入到10mL玻璃管中，除以10μL一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液代替甲醇外，其余按“2.3”條操作，分析獲得的色譜圖見(jiàn)圖3B;其中可樂(lè)定的保留時(shí)間約為2.67min，內(nèi)標(biāo)美樂(lè)托寧的保留時(shí)間約為3.51min。采集給藥后的Beagle犬血漿，按“2.3”條操作，分析獲得的色譜圖見(jiàn)圖3C。結(jié)果顯示，犬血漿基質(zhì)對(duì)待測(cè)物可樂(lè)定及內(nèi)標(biāo)美樂(lè)托寧的測(cè)定無(wú)明顯干擾。A—Blankplasmasample;B—Blankplasmaspikedwithclonidine(25.0ng·L－1)andmelatonin(0.5μg·L－1);C—ABeagledogplasmasamplecollected4hafteroraladministrationofreferenceproductFig．3ＲepresentativeMＲMspectraofclonidine(I)andmelatonin(II，IS)inplasmasamples圖3血漿中可樂(lè)定(I)和內(nèi)標(biāo)美樂(lè)托寧(II)的典型MＲM色譜圖2.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)取可樂(lè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.25、2.50、6.25、12.5、25.0、50.0μg·L－1)各10μL，置于10mL玻璃管中，加入空白犬血漿500μL，制備相當(dāng)于質(zhì)量濃度為25.0、50.0、125、250、500和1000ng·L－1的血漿樣品，并依次加入內(nèi)標(biāo)溶液10μL，其余按“2.3”條操作。每一濃度均進(jìn)行雙樣本分析，得到色譜圖，以可樂(lè)定的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，可樂(lè)定與美樂(lè)托寧的峰面積比值為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]美FDA批準(zhǔn)鹽酸可樂(lè)定緩釋片Kapvay治療注意力缺乏和多動(dòng)癥[J]. 馬培奇.  上海醫(yī)藥. 2011(02)
[2]全自動(dòng)固相萃取與液質(zhì)聯(lián)用方法測(cè)定人體血清中可樂(lè)定血藥濃度[J]. 王博雅,趙芊,王洪允,江驥,胡蓓.  藥物分析雜志. 2010(06)
[3]高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定家兔體內(nèi)可樂(lè)定血藥濃度[J]. 柯光明,張恩宏,王麗,張強(qiáng),杜洪光,郭洪猷.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2004(05)
[4]CVLM咪唑啉-I和α2-腎上腺素受體共同參與可樂(lè)定的降壓效應(yīng)[J]. 白潔,王偉忠,袁文俊,潘燕霞,仲?lài)?guó)琴,蘇定馮.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2003(01)



本文編號(hào)：3393803