目的:通過(guò)研究趨化因子CCL17對(duì)DC細(xì)胞交叉提呈抗原長(zhǎng)肽誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的影響,增加對(duì)交叉提呈分子機(jī)制的認(rèn)識(shí),為腫瘤免疫治療提供新的思路和方法。方法:體外誘導(dǎo)人源樹(shù)突狀DC細(xì)胞,觀察DC細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征及細(xì)胞表面標(biāo)記分子表達(dá)情況;免疫染色法和流式檢測(cè)未成熟DC細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)肽抗原的吞噬能力。將未成熟DC細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)CTL細(xì)胞,然后利用ELISA檢測(cè)體外誘導(dǎo)的CTL細(xì)胞對(duì)IFN-γ的分泌能力,在交叉呈遞過(guò)程中加入蛋白酶體抑制劑LLnL,檢測(cè)CTL細(xì)胞的IFN-γ分泌情況。鈣黃綠素法檢測(cè)體外誘導(dǎo)的CTL細(xì)胞對(duì)負(fù)肽的T2細(xì)胞及肝癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。RT-PCR和ELISA檢測(cè)趨化因子CCL17在DC細(xì)胞中的表達(dá)特性以及交叉呈遞過(guò)程中趨化因子CCL17的含量。通過(guò)趨化因子CCL17中和抗體或利用CRISPR-Cas9技術(shù)敲除未成熟DC細(xì)胞中CCL17基因,檢測(cè)未成熟DC細(xì)胞的吞噬能力,然后檢測(cè)未成熟DC細(xì)胞對(duì)CTL細(xì)胞的活化能力及未成熟DC細(xì)胞交叉激活的CTL細(xì)胞對(duì)負(fù)肽的T2細(xì)胞的殺傷能力。然后通過(guò)外源加入重組CCL17蛋白,檢測(cè)誘導(dǎo)的CTL細(xì)胞的殺傷能力。再通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)加... 

【文章來(lái)源】：廣東藥科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DC細(xì)胞對(duì)Sur79L2長(zhǎng)肽的交叉提呈Fig.1-1Cross-PresentationoflongpeptideSur79L2byDCcells

圖 2-2 DC 細(xì)胞的表面分子表達(dá)情況檢測(cè)Fig.2-2 Detection of surface molecμ lar expression of DC cellsNote: (a) The expression of CD1a molecules on the surface of immature DC cells. (b) Theexpression of CD1a molecμ les on the surface of mature DC cells. (c) The expression of CD86molecules on the surface of immature DC cells. (b) The expression of CD86 molecules on thesurface of mature DC cells.2.3.3 熒光檢測(cè)未成熟 DC 細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)肽抗原的吞噬作用DiI 是一種親脂性熒光染料，進(jìn)入 DC 細(xì)胞膜后，在整個(gè)膜上擴(kuò)散，在其進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，且當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，通常不會(huì)影響細(xì)胞的生存力和吞噬能力，于熒光顯微鏡下被激發(fā)后，在 564nm(TRITC)的吸光

圖 2-3 倒置熒光顯微鏡檢測(cè) DC 細(xì)胞吞噬作用Fig.2-3 Detection of phagocytosis of DC cells by inverted fluorescence microscopyNote:(a) DC cells under white light. (b) DC cells under 564nm. (c) DC cells under 488nm.2.3.4 流式檢測(cè)未成熟 DC 細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)肽抗原的吞噬作用通過(guò)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DiI膜染色，再與FITC標(biāo)記的Sur79L2長(zhǎng)肽抗原共孵育30min后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析，如圖 2-4 所示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，加入 Sur79L2長(zhǎng)肽抗原后的 DC 細(xì)胞 FITC 陽(yáng)性率達(dá)到 70%以上，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組未成熟 DC 細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)肽抗原具有良好的吞噬能力。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]穩(wěn)定表達(dá)人CCL17基因的肝癌細(xì)胞系的建立及CCL17活化T淋巴細(xì)胞功能的初步鑒定[J]. 沈晗,聶建云,邵紅偉,黃樹(shù)林.  廣東醫(yī)學(xué). 2012(21)



本文編號(hào)：3381796