目的:1.闡明泛素-蛋白酶體途徑和GSK-3β、PP2A是否參與調(diào)控三氯化鋁致tau蛋白異常磷酸化。2.研究泛素-蛋白酶體途徑調(diào)控不同種屬來(lái)源細(xì)胞三氯化鋁致tau蛋白異常磷酸化是否存在位點(diǎn)差異。方法:1.選擇鼠源性N2a細(xì)胞株和人源性SH-SY5Y細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)材料,用三氯化鋁進(jìn)行染毒處理,鋁離子濃度分別為0.5、1和2mmol/L,作為低劑量組、中劑量組、高劑量組,對(duì)照組不做任何處理。在細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期進(jìn)行染毒,染毒24h后光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),并利用cck-8檢測(cè)細(xì)胞活力,收集細(xì)胞樣品,提取細(xì)胞總蛋白,用蛋白免疫印跡法分別測(cè)定N2a和SH-SY5Y細(xì)胞的tau-5、pThr181、pThr231、pSer262、pSer396蛋白以及Hsp70和CHIP蛋白的表達(dá)量;ELISA法分別檢測(cè)N2a和SH-SY5Y細(xì)胞泛素（Ub）、GSK-3β和PP2A的表達(dá)量。2.采用蛋白酶體抑制劑MG132處理N2a細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞6h,三氯化鋁染毒,實(shí)驗(yàn)分組為對(duì)照組、5μmol/L MG132組、1mmol/LAl³⁺組、5μmol/L MG132+1mmol/LA... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度三氯化鋁處理N2a細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化（×200）

高劑量組 87.70±0.10*注：與對(duì)照組相比，**P﹤0.05。如圖2所示，光學(xué)顯微鏡下觀察不同染鋁劑量組SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組細(xì)胞狀態(tài)良好，大小均一，密集鋪滿培養(yǎng)瓶底（圖 2A）；低劑量組與對(duì)照組相比，細(xì)胞數(shù)量減少，突觸變短，細(xì)胞間連接減少（圖 2B）；中劑量組細(xì)胞數(shù)量明顯減少，突觸進(jìn)一步變短，部分細(xì)胞變圓（圖 2C）；高劑量組細(xì)胞數(shù)量明顯少于前三組，且細(xì)胞變圓，突觸幾乎消失（圖 2D）。A BC D

13圖 3 不同濃度三氯化鋁處理 N2a 細(xì)胞 24h 后，細(xì)胞總 tau 蛋白及磷酸化 tau 蛋白表達(dá)的變化情況。隨著染鋁濃度的升高，總 tau 蛋白表達(dá)量增加（A），pThr231（C）、pSer262（D）、pSer396（E）位點(diǎn)的磷酸化程度升高，但 pThr181（B）位點(diǎn)的磷酸化程度隨染鋁濃度升高變化不明顯。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果以內(nèi)參蛋白 GADPH 標(biāo)準(zhǔn)化后表示。與對(duì)照組相比，#P＜0.01。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]銅、鐵、鋅、鋁通過(guò)Akt/GSK-3β信號(hào)通路誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡[J]. 朱敬麗,路趙碩,吳越,徐彥吉,姚建,王鑫鑫,王德才.  實(shí)用老年醫(yī)學(xué). 2017(08)
[2]Impact of Sub-chronic Aluminium-maltolate Exposure on Catabolism of Amyloid Precursor Protein in Rats[J]. LIANG Rui Feng,LI Wei Qing,WANG Hong,WANG Jun Xia,NIU Qiao.  Biomedical and Environmental Sciences. 2013(06)
[3]慢性鋁暴露對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及tau蛋白磷酸化的影響[J]. 賈志建,路小婷,潘寶龍,王昊,劉瑩,牛僑.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué). 2012(04)
[4]氯化鋰抑制β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞Tau蛋白磷酸化[J]. 孫治坤,楊紅旗,陸國(guó)強(qiáng),丁健青,陳生弟.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2008(01)
[5]三氯化鋁對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞tau蛋白異常磷酸化作用[J]. 王昊,路小婷,賈志健,牛僑.  中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2013 (02)

碩士論文
[1]職業(yè)鋁接觸對(duì)作業(yè)工人tau蛋白磷酸化的影響及作用[D]. 李瑞.山西醫(yī)科大學(xué) 2016
[2]斷乳大鼠亞慢性染鋁對(duì)腦脂質(zhì)過(guò)氧化和海馬細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 王軍明.中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3380927