噻唑烷二酮類藥物（thiazolidinedione TZDs）如曲格列酮、羅格列酮和吡格列酮,主要應(yīng)用于Ⅱ型糖尿病的治療,具有緩解胰島素抵抗,延緩糖尿病進(jìn)展的良好療效,然而肝臟毒性是困擾此類藥物研發(fā)應(yīng)用的一個(gè)重要問題[1]。曲格列酮在2000年因?qū)е聡?yán)重的肝毒性而在美國撤市[2]。2009年羅格列酮和吡格列酮在10年的藥物使用不良事件報(bào)告中,也被指出具有一定的肝毒性[3,4]。噻唑烷二酮類藥物家族仍有新的成員在研發(fā)中,但其肝毒性的發(fā)生機(jī)制仍未得到很好的闡明,雖然羅格列酮和吡格列酮的肝毒性已經(jīng)較曲格列酮明顯降低,但為何三種藥物的毒性相差如此之大,它們致肝損傷的機(jī)制有何差異?目前還缺乏三種藥物系統(tǒng)的毒性比較研究。眾所周知,肝細(xì)胞中所富含的線粒體與肝臟的生物合成、代謝和解毒功能密不可分,同時(shí)在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度、信息傳遞及細(xì)胞死亡等過程中發(fā)揮重要的作用;另一方面,眾多具有心臟毒性、腎毒性、肝毒性和肌肉毒性的藥物,也大多經(jīng)由影響線粒體的結(jié)構(gòu)或功能而誘發(fā)毒性[5]。過去曾報(bào)道過曲格列酮的線粒體毒性,但具體機(jī)制需要進(jìn)一步研究。羅格列酮和吡格列酮對線粒體的影響與肝毒性的關(guān)系也需要得到闡明。在本研... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
主要英漢縮略語名詞對照表
中文摘要
Abstract
前言
1. 噻唑烷二酮類藥物對HepaRG細(xì)胞增殖、凋亡以及細(xì)胞周期的影響
    1.1 前言
    1.2 材料與試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 測定HepaRG細(xì)胞生長曲線
        1.3.3 藥物對HepaRG細(xì)胞增殖的影響
        1.3.4 藥物對HepaRG細(xì)胞凋亡的影響
        1.3.5 藥物對HepaRG細(xì)胞周期的影響
        1.3.6 western-bolt檢測相關(guān)蛋白表達(dá)
        1.3.7 統(tǒng)計(jì)分析
    1.4 結(jié)果
        1.4.0. HepaRG細(xì)胞生長曲線的測定
        1.4.1 三種藥物對HepaRG細(xì)胞增殖的抑制作用
        1.4.2 三種藥物對HepaRG細(xì)胞凋亡的影響
        1.4.3 三種藥物對HepaRG細(xì)胞周期的影響
        1.4.4 Western-blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3 表達(dá)水平 . 161.5 討論
    1.5 討論
    1.6 小結(jié)
2. 噻唑烷二酮類藥物對HepaRG細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)功能的影響
    2.1 前言
    2.2 材料與試劑
        2.2.1 細(xì)胞系
        2.2.2 主要試劑/試劑盒
        2.2.3 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 藥物處理及分組
        2.3.3 細(xì)胞呼吸能量測定實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 線粒體呼吸酶復(fù)合物Ⅰ-Ⅳ活性檢測
        2.3.5 細(xì)胞內(nèi)ROS水平的測定
        2.3.6 ATP生成水平
        2.3.7 藥物對HepaRG細(xì)胞線粒體膜電位的影響
        2.3.8 實(shí)時(shí)定量PCR檢測藥物對線粒體DNA的影響
        2.3.9 藥物對HepaRG細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響
        2.3.10 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 藥物對HepaRG細(xì)胞呼吸作用的影響
        2.4.2 藥物對HepaRG細(xì)胞ATP含量和ROS水平的影響
        2.4.3 藥物對線粒體呼吸酶鏈復(fù)合物的影響
        2.4.4 噻唑烷二酮類藥物降低線粒體膜電位
        2.4.5 噻唑烷二酮類藥物可對線粒體DNA含量造成影響
        2.4.6 藥物作用引起線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3. 噻唑烷二酮類藥物導(dǎo)致HepaRG細(xì)胞氧化損傷及相關(guān)機(jī)制研究
    3.1 前言
    3.2 材料與試劑
        3.2.1 細(xì)胞系
        3.2.2 主要試劑/試劑盒
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 藥物處理及分組
        3.3.3 總抗氧化能力的測定
        3.3.4 總SOD活性檢測
        3.3.5 過氧化氫酶檢測
        3.3.6 谷胱甘肽過氧化物酶檢測
        3.3.7 細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的測定
        3.3.8 Western-blot檢測SIRT1、SIRT3蛋白表達(dá)的變化
        3.3.9 統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 藥物對HepaRG細(xì)胞總抗氧化能力的影響
        3.4.2 三種抗氧化酶的活性變化
        3.4.3 藥物對細(xì)胞內(nèi)MDA含量的影響
        3.4.4 細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白SIRT1、SIRT3表達(dá)的變化
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4. 基于ITRAQ的噻唑烷二酮類藥物線粒體毒性差異蛋白研究
    4.1 前言
    4.2 材料與試劑
        4.2.1 細(xì)胞系
        4.2.2 主要試劑/試劑盒
        4.2.3 主要儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.2 藥物處理及分組
        4.3.3 樣品的制備
        4.3.4 iTRAQ標(biāo)記
        4.3.5 酶解肽段離線預(yù)分離及LC-MS/MS質(zhì)譜分析
        4.3.6 使用ProteinPilot software進(jìn)行蛋白鑒定和相對定量
        4.3.7 生物信息學(xué)分析
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 篩選差異蛋白
        4.4.2 差異蛋白富集分析
        4.4.3 差異蛋白所在信號通路富集分析
        4.4.4 特異蛋白篩選
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
5. 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]日糧錳源和水平對產(chǎn)蛋雞蛋殼品質(zhì)的影響及其機(jī)理[D]. 肖俊峰.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[3]重型再生障礙性貧血骨髓造血免疫損傷機(jī)制的研究[D]. 齊薇薇.天津醫(yī)科大學(xué) 2014
[4]化療藥物誘導(dǎo)胃癌SGC7901細(xì)胞向腫瘤干細(xì)胞轉(zhuǎn)化的EMT機(jī)制研究[D]. 嚴(yán)慧.第四軍醫(yī)大學(xué) 2013
[5]基于iTRAQ技術(shù)的結(jié)直腸癌蛋白標(biāo)志物鑒定[D]. 褚光輝.第二軍醫(yī)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]miR-125b對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響及其潛在靶基因的研究[D]. 何小茜.重慶醫(yī)科大學(xué) 2014
[2]Vimentin影響五指山小型豬間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的研究[D]. 何微.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[3]基于iTRAQ的胃癌多藥耐藥相關(guān)蛋白篩選研究[D]. 蔡習(xí)強(qiáng).第四軍醫(yī)大學(xué) 2012



本文編號：3368810