本實(shí)驗(yàn)旨在應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）法定量檢測(cè)人成骨樣細(xì)胞—MG63細(xì)胞對(duì)載辛伐他汀納米膠束（SVNs）的攝取情況.首先,建立檢測(cè)SVNs中SV含量的HPLC法,確定色譜條件,并對(duì)該方法的專屬性與準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)價(jià).其次,將SVNs與辛伐他�。⊿V）干預(yù)細(xì)胞,在加藥后的不同時(shí)間終止實(shí)驗(yàn),反復(fù)凍融破碎細(xì)胞,提取胞內(nèi)藥物并用HPLC法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè).結(jié)果顯示,當(dāng)流動(dòng)相比例為30:70（V/V）時(shí),定量檢測(cè)SVNs中SV含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方程為y=33782x-1424.5（R2=0.9999）,線性范圍為0.2～3.2μg/mL.該方法專屬性與準(zhǔn)確性均較高,并成功檢測(cè)出了被MG63細(xì)胞攝取到胞內(nèi)的藥物含量.同時(shí),在加藥早期,SVNs與SV相比,SVNs被MG63細(xì)胞攝取的速度較慢,但胞內(nèi)藥物含量顯著高于SV,SVNs與SV被MG63細(xì)胞攝取存在顯著差異. 

【文章來(lái)源】：深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,19(05)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

SV標(biāo)準(zhǔn)品主成分峰保留時(shí)間

MG63細(xì)胞對(duì)SVNs和SV的攝取情況見(jiàn)圖3．結(jié)果顯示，在SVG中，MG63細(xì)胞對(duì)SV的攝入十分迅速，15 min時(shí)胞內(nèi)藥物濃度即達(dá)到最高峰．而MG63細(xì)胞對(duì)SVNs的攝入速度較慢，從30 min開始，MG63對(duì)載藥膠束的攝入量才開始逐漸增多．SVNs被成骨細(xì)胞攝取速度較慢的原因可能與其粒徑過(guò)小及表面未帶電荷有關(guān)系．已有研究顯示，載藥納米膠束的粒徑、表面所帶電荷情況等都可影響細(xì)胞對(duì)載藥納米膠束的攝�。袑W(xué)者[17]報(bào)道載藥納米膠束的粒徑在約50 nm時(shí)，其被細(xì)胞攝取的效率是最高的；而當(dāng)納米表面帶正電荷時(shí)，可增加載藥納米膠束與細(xì)胞膜的吸附能力，從而增加其被細(xì)胞攝取的效率[18]．在今后的實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)控制SVNs的粒徑，并對(duì)其表面進(jìn)行修飾，可增加其被細(xì)胞攝取的效率，從而發(fā)揮出更強(qiáng)的促細(xì)胞成骨分化作用．圖3 MG63細(xì)胞對(duì)SVNs與SV在不同時(shí)間點(diǎn)的攝取情況（n=6;*P<0.05;**P<0.01)

圖2 HPLC法測(cè)定SV的專屬性色譜圖同時(shí)，SVG中的胞內(nèi)SV含量在達(dá)到高峰后隨即迅速下降，這種現(xiàn)象在多形核白細(xì)胞攝取亞胺培南[19]、人牙周膜成纖維細(xì)胞攝取甲硝唑和替硝唑[20]及紅細(xì)胞攝取抗癌鉑的配合物[21]等實(shí)驗(yàn)中均有出現(xiàn)．其可能的原因是，SV以被動(dòng)擴(kuò)散的方式進(jìn)入胞內(nèi)后容易被水解代謝，導(dǎo)致含量下降；也可能是藥物與細(xì)胞膜相互作用使膜通透性發(fā)生改變，導(dǎo)致藥物漏出細(xì)胞外；此外，細(xì)胞膜上的外排蛋白是否也有參與，有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證．


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