目的:腎素-血管緊張素系統(tǒng)在諸如高血壓和動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。血管緊張素II（Angiotensin II,Ang Ⅱ）是腎素-血管緊張素系統(tǒng)主要的活性肽物質(zhì),與內(nèi)皮細(xì)胞紊亂、血管重塑以及血管炎癥密切相關(guān),促進(jìn)高血壓和動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。他汀類藥物如阿托伐他汀能夠通過(guò)維持內(nèi)皮細(xì)胞功能、抗氧化應(yīng)激和促進(jìn)血管一氧化氮的釋放進(jìn)而發(fā)揮抗高血壓的作用。凋亡是一種進(jìn)化上保守的機(jī)制,能夠通過(guò)兩種途徑被激活,即內(nèi)源性途徑和外源性途徑。內(nèi)源性途徑即線粒體依賴途徑,細(xì)胞內(nèi)外多種刺激因素能夠觸發(fā)凋亡信號(hào),最終傳遞至線粒體。細(xì)胞凋亡涉及多個(gè)基因和細(xì)胞器的調(diào)控。在2006年,Terman等人提出溶酶體-線粒體軸理論,目前關(guān)于這一理論在凋亡中的作用研究較少。本研究主要探討Ang Ⅱ能否通過(guò)溶酶體-線粒體軸促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）凋亡,以及阿托伐他汀能否通過(guò)穩(wěn)定溶酶體來(lái)抵抗Ang Ⅱ誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。研究方法:1、培養(yǎng)HUVECs,分別用不同濃度（0μM、0.1μM、1μM、10μM和100... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

阿托伐他汀削弱AngII誘導(dǎo)的HUVECs凋亡

阿托伐他汀對(duì) Ang II 誘導(dǎo)的線粒體功能紊亂的保護(hù)作用細(xì)胞用 1 μM Ang II 和/或 10 μM 阿托伐他汀處理 24 h。線粒體膜電位用 TMRE（Ex/Em:549/573 nm）染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)并用熒光顯微鏡分析（標(biāo)尺: 20 μm）（a）。ROS 用 DCFH-DA（Ex/Em:485/530 nm）染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)并用熒光顯微鏡分析（標(biāo)尺: 20 μm）（b）。線粒體膜電位用 TMRE（Ex/Em: 549/573 nm）染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)并用酶標(biāo)儀分析（c）。ROS 用 DCFH-DA（Ex/Em: 485/530nm）染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)并用酶標(biāo)儀分析（d）。分別提取細(xì)胞質(zhì)蛋白和總蛋白檢測(cè)細(xì)胞色素 c 表達(dá)。細(xì)胞色素氧化酶亞基 IV（COXIV）作為線粒體標(biāo)記物，來(lái)判斷細(xì)胞質(zhì)蛋白是否純（e）。Westernblot 條帶用 Image J 1.47 量化，GAPDH 作為內(nèi)參，對(duì)照組量化為 1（f）。所有結(jié)果均來(lái)自至少三次獨(dú)立重復(fù)試驗(yàn)，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。*p<0.05 表示與對(duì)照組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，#p<0.05 表示與 Ang II 處理組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.3 Ang II 誘導(dǎo)的線粒體功能紊亂與溶酶體功能紊亂的時(shí)序關(guān)系A(chǔ)O 染色實(shí)驗(yàn)和 lysotracker 染色實(shí)驗(yàn)用于評(píng)估溶酶體膜穩(wěn)定性。正常溶酶體內(nèi)

染料所發(fā)出的熒光減弱。1 μMAng II 和/或 10 μM 阿托伐他汀處理細(xì)胞 24 h 后，在Ang II 處理組，AO 所激發(fā)出的紅色熒光減弱，且在細(xì)胞內(nèi)的分布彌散，表明溶酶體膜穩(wěn)定性下降；阿托伐他汀能夠顯著逆轉(zhuǎn)AngII引起的溶酶體膜不穩(wěn)定（圖3A）。1 μM Ang II 和/或 10 μM 阿托伐他汀處理細(xì)胞 24 h 后，在 Ang II 處理組，Lysotracker所激發(fā)出的紅色熒光減弱，表明溶酶體膜穩(wěn)定性下降；阿托伐他汀能夠顯著逆轉(zhuǎn)AngII 引起的溶酶體膜不穩(wěn)定；酶標(biāo)儀量化結(jié)果與熒光顯微鏡下結(jié)果一致（圖 3 B&C）。接下來(lái)我們研究溶酶體膜穩(wěn)定性與線粒體穩(wěn)定性之間的時(shí)序關(guān)系。Lysotracker 是用來(lái)標(biāo)記酸性細(xì)胞器，主要進(jìn)入溶酶體，其激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)為 Ex/Em:577/590nm；TMRE對(duì)線粒體具有高度選擇性，用來(lái)標(biāo)記線粒體，其激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)為 Ex/Em:549/573nm。兩種染料標(biāo)記細(xì)胞后，分別用酶標(biāo)儀檢測(cè) OD 值，對(duì)其進(jìn)行量化分析。1 μMAng II處理細(xì)胞 24h 后

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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