目的:優(yōu)化重組蛋白肝靶向肽-抗腫瘤肽（CSP-MDA-7/IL-24）在原核表達(dá)系統(tǒng)中的培養(yǎng)條件,并提高其蛋白的表達(dá)量。方法:對重組質(zhì)粒在菌株BL21中的生長情況進(jìn)行檢查,確定合適的誘導(dǎo)時機(jī);通過單因素試驗(yàn),優(yōu)化適合重組蛋白最大化表達(dá)的培養(yǎng)條件;并在此基礎(chǔ)上設(shè)計4個因素5個檢測水平的正交實(shí)驗(yàn),從而確定最佳誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)的條件組合。結(jié)果:在pH為7,IPTG濃度為0.15 mmol·L^-1,溫度為42℃、誘導(dǎo)時間為4 h時,重組蛋白表達(dá)百分比達(dá)到最大值。此外,分析顯示在所研究的培養(yǎng)條件中,溫度對重組蛋白表達(dá)水平的影響最為顯著。結(jié)論:本研究結(jié)果為擴(kuò)大重組蛋白CSP-MDA-7/IL-24的生產(chǎn)提供了數(shù)據(jù)支持,并為后期CSP-MDA-7/IL-24的生物學(xué)研究提供了研究材料。 

【文章來源】：藥物分析雜志. 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

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表達(dá)重組質(zhì)粒p ET21b-CSP-MDA-7/IL-24的菌株的生長曲線

圖1 表達(dá)重組質(zhì)粒p ET21b-CSP-MDA-7/IL-24的菌株的生長曲線分析IPTG的濃度對重組蛋白表達(dá)的影響發(fā)現(xiàn)，在固定誘導(dǎo)4 h的情況下，0.1 mmol·L-1 IPTG已經(jīng)能夠誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)。該表達(dá)量在IPTG濃度為0.15 mmol·L-1時達(dá)到最高，占總蛋白量的25%（圖3）。但I(xiàn)PTG濃度的進(jìn)一步增加卻并不能繼續(xù)提高重組蛋白的表達(dá)量。

溫度檢測結(jié)果顯示在17℃時，重組蛋白的表達(dá)量低于SDS-PAGE可檢測到的最小值。在室溫下（22℃），IPTG就能夠誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)。隨著溫度的升高，蛋白的表達(dá)量也逐漸增多，并在42℃時達(dá)到最高，為總蛋白表達(dá)量的55%（圖5）。圖4 p H對重組蛋白表達(dá)的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3328204