發(fā)布時間：2021-08-01 22:47

　　目的:復(fù)制ox-LDL（100μg/ml）誘導(dǎo)的HUVECs氧化損傷模型,并從熊果酸通過Sirt1/Atg5上調(diào)自噬抵抗ox-LDL所致HUVECs氧化應(yīng)激的角度探討其保護作用機制。方法:以體外培養(yǎng)的HUVECs為實驗對象,建立細(xì)胞氧化損傷模型,并篩選出熊果酸最佳預(yù)保護時間及作用濃度。實驗分組如下:正常對照組,模型組,熊果酸組,模型+熊果酸組,模型+維生素E組、自噬抑制劑3-MA組及Sirt1抑制劑EX-527組。采用CCK-8法檢測各組細(xì)胞存活率;化學(xué)酶法檢測細(xì)胞H2O2、MDA、SOD、NO及NOS水平;透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu);ESR自旋捕捉技術(shù)同時定量檢測NO及ROS的釋放量;Western blotting檢測Sirt1、LC3B、p62、Atg5蛋白表達;免疫沉淀法檢測乙�；疉tg5蛋白。結(jié)果:復(fù)制了ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs氧化損傷模型;模型組細(xì)胞SOD、NOS、NO水平下降,MDA、H2O2含量增多;而加入5-20μM熊果酸預(yù)保護16h后,細(xì)胞存活率、SOD、NOS、NO水平上升,MDA、H2O2產(chǎn)生減少,且呈劑量依賴性（P<0.05）。透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 實驗材料
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 主要試劑和材料
    1.3 主要儀器設(shè)備
第二章 實驗方法
    2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、凍存與復(fù)蘇
        2.1.1 HUVECs的傳代培養(yǎng)
        2.1.2 HUVECs的凍存與復(fù)蘇
    2.2 實驗分組與處理
        2.2.1 ox-LDL氧化損傷模型的建立
        2.2.2 熊果酸細(xì)胞毒性篩選
        2.2.3 熊果酸預(yù)保護時間及濃度篩選
        2.2.4 實驗分組設(shè)計
    2.3 實驗方法與檢測指標(biāo)
        2.3.1 熊果酸對氧化損傷后HUVECs細(xì)胞生存率的影響
        2.3.2 3-MA及EX-527對ox-LDL損傷的HUVECs細(xì)胞生存率的影響
        2.3.3 SOD、MDA、NOS、NO、H2O2測定
        2.3.4 透射電鏡
        2.3.5 電子自旋共振（ESR）檢測各組細(xì)胞NO及ROS釋放量
        2.3.6 免疫印跡法（Western Blotting）檢測Sirt1、LC3B、p62、Atg5蛋白
        2.3.7 免疫沉淀法（Immunoprecipitation, IP）檢測乙�；疉tg5蛋白
    2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 ox-LDL造模濃度的篩選結(jié)果
    3.2 熊果酸細(xì)胞毒性的篩選結(jié)果
    3.3 熊果酸預(yù)保護時間及濃度篩選
    3.4 熊果酸對氧化損傷后HUVECs細(xì)胞生存率的影響
    3.5 熊果酸對ox-LDL損傷的HUVECs中H2O2、SOD及MDA的影響
    3.6 熊果酸對ox-LDL損傷的內(nèi)皮細(xì)胞中NO及NOS的影響
    3.7 熊果酸對ox-LDL損傷的內(nèi)皮細(xì)胞自噬水平的影響
    3.8 熊果酸對Sirt1蛋白表達的影響
    3.9 3-MA及EX-527對ox-LDL損傷的HUVECs細(xì)胞生存率的影響
    3.10 電子自旋共振（ESR）檢測HUVECs內(nèi)NO及ROS釋放量
    3.11 熊果酸通過Sirt1激活自噬保護ox-LDL損傷的HUVECs
    3.12 自噬相關(guān)基因Atg5乙�；鞍妆磉_水平檢測
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號：3316381