目的:復(fù)制高氧化程度的氧化型低密度脂蛋白（High ox-LDL）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）損傷病理模型,證明熊果酸（UA）經(jīng)ROCK/PPAR-γ/CXCL16信號通路保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。方法:以HUVECs為受試對象,篩選確定High ox-LDL的最佳造模濃度（24h）。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為:正常組、High ox-LDL組、UA+High ox-LDL組、ROCK特異性抑制劑（Y27632）組、Y27632+High ox-LDL組、UA+Y27632+High ox-LDL組、PPAR-γ特異性激活劑（羅格列酮）組、羅格列酮+High ox-LDL組、UA+羅格列酮+High ox-LDL組、PPAR-γ特異性抑制劑（GW9662組）、GW9662+High ox-LDL組、UA+GW9662+High ox-LDL組。采用CCK8法檢測各組細(xì)胞的存活率;應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),檢測不同處理組中ROCK磷酸化水平（p-ROCK/ROCK非磷酸化）以及PPAR-γ、CXCL16在m RNA和蛋白水平的表達(dá),并運(yùn)用特異性抑制劑/激活劑證明其級聯(lián)關(guān)系;Amplite ROS Green... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一章 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 主要試劑和材料
    1.3 儀器設(shè)備
第二章 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）的傳代培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇
        2.1.1 HUVECs的傳代培養(yǎng)
        2.1.2 HUVECs的凍存、復(fù)蘇
    2.2 高氧化程度的ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs氧化損傷模型
    2.3 CCK8法檢測不同濃度的熊果酸對High ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs氧化損傷的保護(hù)作用
    2.4 CCK8法檢測不同的抑制劑對HUVECs生存率的影響
    2.5 RT-PCR檢測ROCK、PPAR-γ、CXCL16的m RNA水平的表達(dá)變化
    2.6 免疫印跡（Western Blot）
    2.7 細(xì)胞內(nèi)ROS試劑盒檢測不同給藥組的ROS的表達(dá)變化
    2.8 細(xì)胞內(nèi)ROS試劑盒檢測不同抑制劑處理組ROS的表達(dá)變化
    2.9 計(jì)算機(jī)輔助藥物軟件（CADD）模擬UA與ROCK的空間分子對接情況
    2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 不同濃度的High ox-LDL對細(xì)胞存活率的影響
    3.2 不同濃度的熊果酸對High ox-LDL誘導(dǎo)的氧化損傷的保護(hù)作用
    3.3 不同的抑制劑對細(xì)胞存活率的影響
    3.4 熊果酸對High ox-LDL損傷的HUVECs內(nèi)ROCK、PPAR-γ、CXCL16在m RNA水平表達(dá)的影響
    3.5 熊果酸對High ox-LDL損傷的HUVECs內(nèi)ROCK、PPAR-γ、CXCL16在蛋白水平表達(dá)的影響
    3.6 ROCK的特異性抑制劑Y27632對High ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs氧化損傷模型中的PPAR-γ、CXCL16表達(dá)的影響
    3.7 PPAR-γ的特異性激活劑羅格列酮、特異性抑制劑GW9662對High ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs氧化損傷模型中CXCL16表達(dá)的影響
    3.8 不同處理組ROS的表達(dá)變化
    3.9 CADD模擬的UA與ROCK的空間分子對接
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的研究和應(yīng)用[J]. 王剛,張凱倫.  醫(yī)學(xué)綜述. 2011(07)
[2]Rho/ROCK信號通路參與晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的人皮膚微血管內(nèi)皮細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變[J]. 王吉萍,郭曉華,王陵軍,李強(qiáng),陳波,吳煒,黃緒亮,黃巧冰.  生理學(xué)報(bào). 2009(02)



本文編號：3312059