自噬是細(xì)胞質(zhì)組分利用溶酶體降解的主要途徑。自噬過(guò)程發(fā)生異常與多種人類疾病相關(guān),如癌癥、心肌病等。目前,通過(guò)藥物靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬活性以達(dá)到抗腫瘤目的,已經(jīng)成為癌癥治療的新策略。多糖調(diào)節(jié)自噬活性的研究逐漸引起人們的關(guān)注,并且已取得一定得進(jìn)展。黑根霉胞外多糖（exopolysaccharides from Rhizopus nigricans,EPS1-1）是從黑根霉菌的發(fā)酵液中分離得到的一種均一的雜多糖。前期研究發(fā)現(xiàn),EPS1-1具有免疫增強(qiáng)活性以及良好的抗腫瘤活性,能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,對(duì)S180和CT26荷瘤小鼠以及AOM/DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸癌小鼠腫瘤的生長(zhǎng)也有明顯的抑制作用。但是,EPS1-1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用是否與調(diào)控自噬活性有關(guān)目前是未知的。因此,本文研究了EPS1-1對(duì)U87MG細(xì)胞自噬的影響及其作用機(jī)制,并對(duì)EPS1-1影響自噬和其與凋亡間的關(guān)系進(jìn)行了初步探討。通過(guò)MTT法和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)EPS1-1可以有效抑制U87MG細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。電鏡觀察發(fā)現(xiàn)0.4mg/ml的EPS1-1處理48h后,U87MG細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生了自噬溶酶體。自噬小體膜結(jié)合形式的LC3（LC3-Ⅱ）... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１?ＭＴＴ?（Ａ）和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)（Ｂ）檢測(cè)ＥＰＳＭ對(duì)Ｕ８７ＭＧ細(xì)胞增殖的影響

理４８ｈ后Ｕ８７ＭＧ細(xì)胞內(nèi)自噬體結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果表明，ＥＰＳ１－１處理后細(xì)胞內(nèi)??存在一定量的自噬溶酶體結(jié)構(gòu)。而對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)基本無(wú)明顯的自噬體結(jié)構(gòu)產(chǎn)生??（圖３．２）。表明，ＥＰＳ１－１能增加Ｕ８７ＭＧ細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體結(jié)構(gòu)數(shù)量。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＰＳ１－１?（０．４ｍｇ／ｍｌ）??：Ｗ??，?＇嚼，?；＂??明丄，??圖３．２ＥＰＳ１－１對(duì)Ｕ８７ＭＧ細(xì)胞內(nèi)自噬體和自噬溶酶體結(jié)構(gòu)的影響。ＡＶｄ：晚期自噬溶酶體。??Ｆｉｇ．?３．２?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ?１－１?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ?ａｎｄ??ａｕｔｏｌｙｓｏｓｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｂｙ?ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．?Ｔｈｅ??ａｒｒｏｗｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｄｅｇｒａｄｉｎｇ?ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ?ｖａｃｕｏｌｅｓ．??３．３?ＥＰＳｌ－ｌ對(duì)Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)置的影響??ＭＡＰ１ＬＣ３／ＬＣ３是自噬過(guò)程中的關(guān)鍵因子，參與自噬體的成熟過(guò)程。細(xì)胞內(nèi)??存在兩種形式的ＬＣ３。胞質(zhì)形式ＬＣ３?（ＬＣ３－Ｉ）以及自噬體膜結(jié)合形式的ＬＣ３??（ＬＣ３－ＩＩ）。將ＬＣ３與ＥＧＦＰ串聯(lián)連接，當(dāng)自噬被激活，由于兩種ＬＣ３分布不??同，ＥＧＦＰ－ＬＣ３蛋白也由原來(lái)的胞質(zhì)分布狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槟そY(jié)合聚集狀態(tài)，因此，可??見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)形成的綠色熒光斑點(diǎn)（ＬＣ３ｐｉｍｃｔａ）

０．４和０．８ｍｇ／ｍｌ的ＥＰＳ１－１處理Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ細(xì)胞２４ｈ之后，焚光顯微鏡??觀察發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)基本無(wú)綠色熒光亮點(diǎn)聚集，而ＥＰＳ１－１處理后細(xì)胞內(nèi)出??現(xiàn)不同程度的熒光亮點(diǎn)聚集（圖３．３）。表明，ＥＰＳ１－１能夠增加Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ??細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)量。??圖３．３?ＥＰＳ１－１處理對(duì)Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)量的影響。??Ｆｉｇ．?３．３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅｓ?ｉｎ??Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１??ｆｏｒ?２４ｈ．?Ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ＬＣ３?ｐｕｎｃｔａ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．??３．４?ＥＰＳ１－１對(duì)Ｕ８７ＭＧ細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)基因表達(dá)的影響??細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)基因（ＡＴＧ）涉及對(duì)自噬活性的調(diào)控。為了進(jìn)一步研宄??ＥＰＳ１－１對(duì)細(xì)胞內(nèi)自嘍相關(guān)基因表達(dá)的影響，使用ＲＴ－ｑＰＣＲ實(shí)驗(yàn)分析了?ＥＰＳ１－１??處理Ｕ８７ＭＧ細(xì)胞４８ｈ后，細(xì)胞內(nèi)６個(gè)參與自噬過(guò)程的基因表達(dá)的變化。ＵＬＫ１??是參與自噬早期調(diào)節(jié)的基因，對(duì)于誘導(dǎo)自嗟是必須的［２７］。Ｂｅｃｌｉｎｌ調(diào)節(jié)自噬，能??夠促進(jìn)該過(guò)程的起始。研宄發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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