自噬是細胞質(zhì)組分利用溶酶體降解的主要途徑。自噬過程發(fā)生異常與多種人類疾病相關,如癌癥、心肌病等。目前,通過藥物靶向調(diào)節(jié)細胞自噬活性以達到抗腫瘤目的,已經(jīng)成為癌癥治療的新策略。多糖調(diào)節(jié)自噬活性的研究逐漸引起人們的關注,并且已取得一定得進展。黑根霉胞外多糖（exopolysaccharides from Rhizopus nigricans,EPS1-1）是從黑根霉菌的發(fā)酵液中分離得到的一種均一的雜多糖。前期研究發(fā)現(xiàn),EPS1-1具有免疫增強活性以及良好的抗腫瘤活性,能夠誘導腫瘤細胞凋亡,對S180和CT26荷瘤小鼠以及AOM/DSS誘導的結腸癌小鼠腫瘤的生長也有明顯的抑制作用。但是,EPS1-1對腫瘤生長的抑制作用是否與調(diào)控自噬活性有關目前是未知的。因此,本文研究了EPS1-1對U87MG細胞自噬的影響及其作用機制,并對EPS1-1影響自噬和其與凋亡間的關系進行了初步探討。通過MTT法和細胞克隆形成實驗研究發(fā)現(xiàn)EPS1-1可以有效抑制U87MG細胞生長和增殖。電鏡觀察發(fā)現(xiàn)0.4mg/ml的EPS1-1處理48h后,U87MG細胞內(nèi)產(chǎn)生了自噬溶酶體。自噬小體膜結合形式的LC3（LC3-Ⅱ）... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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圖３．１?ＭＴＴ?（Ａ）和細胞克隆形成實驗（Ｂ）檢測ＥＰＳＭ對Ｕ８７ＭＧ細胞增殖的影響

理４８ｈ后Ｕ８７ＭＧ細胞內(nèi)自噬體結構的變化。結果表明，ＥＰＳ１－１處理后細胞內(nèi)??存在一定量的自噬溶酶體結構。而對照組細胞內(nèi)基本無明顯的自噬體結構產(chǎn)生??（圖３．２）。表明，ＥＰＳ１－１能增加Ｕ８７ＭＧ細胞內(nèi)自噬溶酶體結構數(shù)量。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＰＳ１－１?（０．４ｍｇ／ｍｌ）??：Ｗ??，?＇嚼，?；＂??明丄，??圖３．２ＥＰＳ１－１對Ｕ８７ＭＧ細胞內(nèi)自噬體和自噬溶酶體結構的影響。ＡＶｄ：晚期自噬溶酶體。??Ｆｉｇ．?３．２?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ?１－１?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ?ａｎｄ??ａｕｔｏｌｙｓｏｓｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｂｙ?ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．?Ｔｈｅ??ａｒｒｏｗｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｄｅｇｒａｄｉｎｇ?ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ?ｖａｃｕｏｌｅｓ．??３．３?ＥＰＳｌ－ｌ對Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ細胞內(nèi)自噬小體數(shù)置的影響??ＭＡＰ１ＬＣ３／ＬＣ３是自噬過程中的關鍵因子，參與自噬體的成熟過程。細胞內(nèi)??存在兩種形式的ＬＣ３。胞質(zhì)形式ＬＣ３?（ＬＣ３－Ｉ）以及自噬體膜結合形式的ＬＣ３??（ＬＣ３－ＩＩ）。將ＬＣ３與ＥＧＦＰ串聯(lián)連接，當自噬被激活，由于兩種ＬＣ３分布不??同，ＥＧＦＰ－ＬＣ３蛋白也由原來的胞質(zhì)分布狀態(tài)轉變?yōu)槟そY合聚集狀態(tài)，因此，可??見細胞內(nèi)形成的綠色熒光斑點（ＬＣ３ｐｉｍｃｔａ）

０．４和０．８ｍｇ／ｍｌ的ＥＰＳ１－１處理Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ細胞２４ｈ之后，焚光顯微鏡??觀察發(fā)現(xiàn)，對照組細胞內(nèi)基本無綠色熒光亮點聚集，而ＥＰＳ１－１處理后細胞內(nèi)出??現(xiàn)不同程度的熒光亮點聚集（圖３．３）。表明，ＥＰＳ１－１能夠增加Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ??細胞內(nèi)自噬小體數(shù)量。??圖３．３?ＥＰＳ１－１處理對Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ細胞內(nèi)自噬小體數(shù)量的影響。??Ｆｉｇ．?３．３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅｓ?ｉｎ??Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１??ｆｏｒ?２４ｈ．?Ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ＬＣ３?ｐｕｎｃｔａ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．??３．４?ＥＰＳ１－１對Ｕ８７ＭＧ細胞內(nèi)自噬相關基因表達的影響??細胞內(nèi)自噬相關基因（ＡＴＧ）涉及對自噬活性的調(diào)控。為了進一步研宄??ＥＰＳ１－１對細胞內(nèi)自嘍相關基因表達的影響，使用ＲＴ－ｑＰＣＲ實驗分析了?ＥＰＳ１－１??處理Ｕ８７ＭＧ細胞４８ｈ后，細胞內(nèi)６個參與自噬過程的基因表達的變化。ＵＬＫ１??是參與自噬早期調(diào)節(jié)的基因，對于誘導自嗟是必須的［２７］。Ｂｅｃｌｉｎｌ調(diào)節(jié)自噬，能??夠促進該過程的起始。研宄發(fā)現(xiàn)：與對照組相比

【參考文獻】：
期刊論文
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