成纖維細(xì)胞生長因子21（FGF21）是近些年來研究比較成熟的代謝調(diào)節(jié)劑之一,在糖尿病以及肥胖等代謝性疾病治療的研究中已經(jīng)展現(xiàn)出它的重要作用,因此,FGF21已經(jīng)成為治療代謝性疾病的潛在藥物。然而,由于它本身的性質(zhì),即:（1）蛋白質(zhì)激素;（2）體內(nèi)半衰期很短,使得外源給予FGF21無法滿足更加方便而且令其持久的發(fā)揮作用的愿望。我們課題組研究發(fā)現(xiàn),運用乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）這一食品級細(xì)菌作為宿主菌表達(dá)人源FGF21,就可以滿足方便且在體內(nèi)持久發(fā)揮FGF21作用的愿望。傳統(tǒng)細(xì)菌經(jīng)過基因改良后,作為異源蛋白表達(dá)宿主時,常常用抗生素抗性基因做為篩選標(biāo)記,這樣就存在很大的生物轉(zhuǎn)基因引起抗生素耐藥潛在危機(jī)。因此,對食品級細(xì)菌做為表達(dá)系統(tǒng)的研究就顯得尤為重要。材料與方法1.菌株選擇乳Lactococcus lactis NZ3900,載體選擇PNZ8149（LacF為篩選標(biāo)記）,Gen Bank查詢Human FGF21序列,全基因合成,經(jīng)過亞克隆,雙酶切與載體連接,電轉(zhuǎn)化入LacF基因缺失的菌株NZ3900,Elliker板篩選陽性克隆,菌液PCR,測序鑒定。為檢測蛋白在... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

全球范圍肥胖現(xiàn)狀

引言酸乳球菌為公認(rèn)的食品級細(xì)菌，無致病性，抑制有害細(xì)菌繁殖的作用，因此被廣泛應(yīng)用球菌做藥物承載系統(tǒng)的研究越來越成熟，具并且乳酸乳球菌的基因組已經(jīng)獲得，USP45 使得該蛋白序列在后期藥物呈遞系統(tǒng)研究中對乳酸乳球菌作為藥物呈遞系統(tǒng)的研究最多的 誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。課題中，我們選擇 NICE 系統(tǒng)中的 NZ3900陰性菌相比較有較厚的細(xì)胞壁，因此，其重法[57-59]，NZ3900 也是 LacF 基因缺失的法生長，本課題中，表達(dá)載體選擇 PNZ814900/PNZ8149 組合使得乳糖成為陽性菌株的篩中的誘導(dǎo)劑為食品防腐劑 Nisin，又使得該改造后的 PNZ8149 載體做一圖譜，如圖 2.

小心吸取上清至一個新的離心管中；苯酚、氯仿抽提液,充分振蕩混勻，12000r/min 離心 5m清至一個新的離心管中；積預(yù)冷的無水乙醇(-20 度保存)以及 0.1 體積的 3mol/L置 20min，12000r/min 離心 5min；淀加入 1mL70%乙醇充分洗滌，12000r/min 離心 10mi 10min；dH2O，37 度放置 30min，使充分溶解。剩余菌液，保菌后-80℃保存；提取出來的質(zhì)粒濃度測量結(jié)果克隆片段（716bps）瓊脂糖凝膠分析：條帶大小與預(yù)期


本文編號：3280929