糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病的微血管病變中最常見的并發(fā)癥,是全球發(fā)病率較高的致盲性眼病。糖尿病視網(wǎng)膜病變與高血糖癥關(guān)系密切,高血糖可以激活多種分子途徑,進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)退行性病變以及視網(wǎng)膜新生血管生成。目前,多數(shù)治療從抑制新生血管入手,采用手術(shù)或者藥物治療手段,但是治療效果不理想,不能使已經(jīng)產(chǎn)生的視網(wǎng)膜損傷恢復(fù)。從病因上直接干預(yù)視網(wǎng)膜內(nèi)血糖水平可能是預(yù)防及治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的有效策略,然而因眼部結(jié)構(gòu)的特殊性,視網(wǎng)膜疾病的給藥手段和藥物遞送系統(tǒng)有限,在視網(wǎng)膜靶向性、安全性、治療效果、患者依從性和減少繼發(fā)感染等方面存在局陷。目的:根據(jù)眼內(nèi)葡萄糖由血-視網(wǎng)膜屏障的葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白轉(zhuǎn)運而來的供應(yīng)機制,設(shè)計并建立針對葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1的大分子藥物,制備表面富集透明質(zhì)酸用以靶向視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的載藥納米粒子,對制劑進(jìn)行表征研究、大分子藥物含量測定及安全性評價。納米粒子眼內(nèi)給藥后,評估納米粒子藥物對糖尿病性視網(wǎng)膜病變的藥效學(xué)效果。方法:（1）使用體外篩選和T7核酸內(nèi)切酶1（T7 endonuclease I,T7E1）驗證方法篩選穩(wěn)定的向?qū)NA（Single guide RNA,sgRNA）,與規(guī)律成簇間... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

高血糖水平下的多元醇通路[11]

第一章緒論3雖然DR的具體發(fā)病機制尚未明確，但可以確定的是，視網(wǎng)膜上的葡萄糖過度轉(zhuǎn)運導(dǎo)致視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖穩(wěn)態(tài)失衡是導(dǎo)致DR發(fā)病的重要因素，高葡萄糖水平激活多種信號傳導(dǎo)途徑，主要有多元醇途徑、蛋白激酶C（PKC）的激活[12]、己糖激酶途徑及晚期糖基化終產(chǎn)物（AGE）形成增多。這些途徑導(dǎo)致氧化應(yīng)激、炎癥和血管功能障礙的增加以及多種生長因子的上調(diào)，并最終導(dǎo)致DR的發(fā)生發(fā)展。圖1.2高血糖癥激活多種通路[11]1.1.3糖尿病視網(wǎng)膜病變治療手段糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理特征是功能性血管細(xì)胞逐漸喪失，血管間連接處緩慢裂解，導(dǎo)致血管滲漏和缺血性神經(jīng)纖維層梗塞，后期階段的特征在于炎癥細(xì)胞浸潤、組織破壞和新血管增生。針對糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)展的程度，所施予的治療方法有所不同。早期的DR以藥物治療為主，晚期及高風(fēng)險增殖性DR臨床多采用手術(shù)方法[13]，但手術(shù)存在潛在風(fēng)險、應(yīng)用范圍局限和復(fù)發(fā)不確定性，使用藥物來預(yù)防及治療DR，或者作為一種手術(shù)的輔助治療手段，應(yīng)用更為廣泛。目前，針對DR新開發(fā)的有效藥物主要為VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）抑制劑和糖皮質(zhì)激素。VEGF抑制劑通過抑制因視網(wǎng)膜組織血流減少導(dǎo)致的VEGF活化，從而阻斷新血管形成和增強血管通透性，對早期DR具有顯著影響。但這種

吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文8PAM附近對DNA分子進(jìn)行裂解。如圖1.4所示，所述crRNA包含一個20-nt的protospacer元件和一段可以與tracrRNA互補的附加序列，tracrRNA負(fù)責(zé)與crRNA雜交并結(jié)合蛋白Cas9，共同構(gòu)成CRISPR-Cas9復(fù)合物。Cas9蛋白含有兩個核酸酶結(jié)構(gòu)域，分別稱為RuvC結(jié)構(gòu)域和HNH結(jié)構(gòu)域，其中，RuvC域切割非互補的DNA鏈，而HNH域切割互補的DNA鏈。在基因編輯應(yīng)用中，tracrRNA：crRNA通常被設(shè)計為含有兩個關(guān)鍵部分序列的sgRNA，在3"端結(jié)合Cas9的和5"末端的引導(dǎo)結(jié)合靶DNA序列的雙鏈RNA結(jié)構(gòu)，從而具有識別基因組中的特定序列，和Cas9對DNA序列的剪切的雙重作用。圖1.4Cas9蛋白酶（A）與sgRNA（B）示意圖[38]在CRISPR-Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)的基因組編輯形成DNA雙鏈斷裂后，非同源末端連接修復(fù)途徑（NHEJ）或同源定向修復(fù)途徑（HDR）將被啟動。經(jīng)NHEJ修復(fù)途徑常常導(dǎo)致基因插入/缺失（InDel），最終導(dǎo)致靶基因失活。需要供體DNA模板以修復(fù)HDR途徑的DNA雙鏈斷裂則可以精確地插入供體DNA模板在指定的DNA序列位點中，從而可以實現(xiàn)基因置換或基因敲入，但通常效率比基因敲除較低。1.3.3CRISPR/Cas9基因編輯在疾病治療中的應(yīng)用在臨床基因治療領(lǐng)域，CRISPR/Cas9療法的應(yīng)用正在探索中。2016年美國賓夕法尼亞大學(xué)提出的CRISPR編輯T細(xì)胞治療方案通過了FDA的批準(zhǔn)，并于

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Nanotechnology-based strategies for treatment of ocular disease[J]. Yuhua Weng,Juan Liu,Shubin Jin,Weisheng Guo,Xingjie Liang,Zhongbo Hu.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2017(03)

博士論文
[1]血小板反應(yīng)蛋白-1在小鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中的作用及在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的應(yīng)用價值[D]. 王爽.吉林大學(xué) 2012



本文編號：3276993