目的:Streptomyces koyangensis SCSIO 5802是分離自南海底泥沉積物的一株放線菌,研究發(fā)現(xiàn)在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下發(fā)酵分離得到的化合物不僅對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）具有較強(qiáng)的抑制活性,還具有細(xì)胞毒性。本論文以S.koyangensis SCSIO 5802為研究對(duì)象,利用基因敲除、基因激活、培養(yǎng)條件優(yōu)化等方法進(jìn)一步挖掘該菌株生產(chǎn)次級(jí)代謝產(chǎn)物的潛力。方法:首先,采用Illumina Miseq結(jié)合第三代測(cè)序技術(shù)對(duì)S.koyangensis SCSIO5802菌株的基因組測(cè)序,得到該菌株的完成圖,利用生物信息學(xué)方法分析S.koyangensis SCSIO 5802全基因組序列,并使用antiSMASH在線軟件進(jìn)行基因注釋（http://antismash.secondarymetabolites.org/）;第二,利用PCR-targeting的方法對(duì)負(fù)責(zé)abyssomicin類和candicidin類化合物的生物合成的聚酮合酶基因abmB1和canD進(jìn)行同框缺失,... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：117 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PCR-Targeting技術(shù)和接合轉(zhuǎn)移技術(shù)獲取雙交換突變株的示意圖

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 涂佳佳（4）發(fā)酵上清加入等體積的丁酮萃取，收集有機(jī)相，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，得上清浸膏。菌體沉淀加入 3 倍菌體體積的丙酮浸泡超聲，收集上層丙酮有機(jī)相，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，得菌體浸膏。（5）將菌體浸膏和上清浸膏合并拌樣，用餾分甲醇/氯仿或者石油醚/乙酸乙酯為 2:98，4:96，6:94，8:92，15:85，1:9，2:8，3:7，4:6，5:5 分別過(guò)硅膠分析柱。（6）將所得不同餾分的化合物進(jìn)行 HPLC分析找到目標(biāo)化合物。（7）根據(jù)目標(biāo)化合物設(shè)定 HPLC分析程序來(lái)分離得到目標(biāo)化合物。（8）將分離所得目標(biāo)化合物 MS、NMR分析結(jié)構(gòu)。1.4 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線

圖 13 S. koyangensis SCSIO 5802AC突變株低分辨質(zhì)譜分析Figure 13 Low-resolution mass spectrometry analysis of S. koyangensis SCSIO 5802ACmutant將發(fā)酵產(chǎn)物用高速離心機(jī)離心，分開(kāi)收集菌液、菌體。菌液用丁酮萃取濃縮、菌體用丙酮萃取并濃縮，把菌體和菌液的提取物分別經(jīng) HPLC-DAD 檢測(cè)分析見(jiàn)圖 14。因?yàn)榫w和菌液經(jīng)過(guò) HPLC 檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)并不相同，所以將兩者分開(kāi)分離。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]北極新奧爾松地區(qū)地衣內(nèi)生真菌的抑菌活性[J]. 付少彬,閆松,辛慶,楊忠鳳,孟慶峰.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2016(05)
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本文編號(hào)：3261714