不同MEK1/2抑制劑對NF1敲低的施萬細胞增殖活性的影響
發(fā)布時間：2021-06-22 22:39
目的:構(gòu)建慢病毒干擾載體介導的NF1敲低RSC96(NF1kdRSC96)施萬細胞株,對比不同MEK1/2抑制劑對該穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株增殖的影響。方法:運用慢病毒干擾載體構(gòu)建NF1kd的施萬細胞模型,采用q RT-PCR及Western免疫印跡驗證慢病毒干擾載體組(NF1kd組)和空白載體組的NF1表達水平;應用5種MEK1/2抑制劑,包括司美替尼（Selumetinib）、貝美替尼（Binimetinib）、考比替尼（Cobimetinib）、曲美替尼（Trametinib）、PD0325901處理細胞,CCK-8法檢測不同MEK1/2抑制劑在時間梯度和濃度梯度下的抑制作用。使用Graphpad Prism 5計算NF1kd組和空白載體組中5種抑制劑的半抑制濃度(IC50)值,采用SPSS 22.0軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果:5種MEK1/2抑制劑均對NF1kd施萬細胞的增殖有抑制作用（P<0.05）。72 h時,PD0325901、Cobimeti...
【文章來源】：中國口腔頜面外科雜志. 2020,18(04)
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
沉默NF1表達的施萬細胞模型。A.shNF1-RSC96細胞株熒光密度觀察；B.NF1基因的mRNA水平檢測；C.NF1蛋白水平檢測；D.NF1敲減后RAS-MAPK通路變化
圖1 沉默NF1表達的施萬細胞模型。A.shNF1-RSC96細胞株熒光密度觀察；B.NF1基因的mRNA水平檢測；C.NF1蛋白水平檢測；D.NF1敲減后RAS-MAPK通路變化目前已用于腫瘤治療的MEK抑制劑種類較多，由于各種MEK抑制劑的分子結(jié)構(gòu)不同，存在對MEK位點的選擇性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，對各種腫瘤的臨床治療效果也各異。本研究使用慢病毒干擾載體構(gòu)建NF1基因低表達的RSC96施萬細胞系，模擬疾病狀態(tài)下NF1基因突變的功能下調(diào)。選用4種與Selumetinib作用位點相近的MEK1/2抑制劑，對比時間梯度和半數(shù)抑制濃度方面的藥效差異。實驗結(jié)果顯示，5種MEK抑制劑均能抑制NF1kd施萬細胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h時仍有顯著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h時抑制效果明顯減弱。半數(shù)抑制濃度實驗中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的藥物濃度抑制NF1kd細胞增殖，有效區(qū)分了對照組細胞和NF1kd組細胞，組間差異明顯，表現(xiàn)出殺傷腫瘤細胞的敏感性。綜合實驗結(jié)果，Cobimetinib不僅具有長效的抑制作用，同時具有特異性殺傷NF1kd施萬細胞的能力，有一定的潛在治療優(yōu)勢。但是，以MEK為靶點的藥物一般會導致皮疹、肌酸激酶升高、心臟射血分數(shù)下降等副作用。在既往臨床研究中，Trametinib發(fā)生的3～4級不良事件為皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血壓（26/211）等[20];Binimetinib發(fā)生的3～4級不良事件為痤瘡樣皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹瀉（4/71）、小腸穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib單獨用藥時耐受較好，發(fā)生的3～4級不良事件為腹瀉（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批準聯(lián)合Vemurafenib治療BRAF V600E或V600K突變陽性、不可切除性或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是臨床治療NF1的潛在靶向藥物。
目前已用于腫瘤治療的MEK抑制劑種類較多，由于各種MEK抑制劑的分子結(jié)構(gòu)不同，存在對MEK位點的選擇性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，對各種腫瘤的臨床治療效果也各異。本研究使用慢病毒干擾載體構(gòu)建NF1基因低表達的RSC96施萬細胞系，模擬疾病狀態(tài)下NF1基因突變的功能下調(diào)。選用4種與Selumetinib作用位點相近的MEK1/2抑制劑，對比時間梯度和半數(shù)抑制濃度方面的藥效差異。實驗結(jié)果顯示，5種MEK抑制劑均能抑制NF1kd施萬細胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h時仍有顯著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h時抑制效果明顯減弱。半數(shù)抑制濃度實驗中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的藥物濃度抑制NF1kd細胞增殖，有效區(qū)分了對照組細胞和NF1kd組細胞，組間差異明顯，表現(xiàn)出殺傷腫瘤細胞的敏感性。綜合實驗結(jié)果，Cobimetinib不僅具有長效的抑制作用，同時具有特異性殺傷NF1kd施萬細胞的能力，有一定的潛在治療優(yōu)勢。但是，以MEK為靶點的藥物一般會導致皮疹、肌酸激酶升高、心臟射血分數(shù)下降等副作用。在既往臨床研究中，Trametinib發(fā)生的3～4級不良事件為皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血壓（26/211）等[20];Binimetinib發(fā)生的3～4級不良事件為痤瘡樣皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹瀉（4/71）、小腸穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib單獨用藥時耐受較好，發(fā)生的3～4級不良事件為腹瀉（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批準聯(lián)合Vemurafenib治療BRAF V600E或V600K突變陽性、不可切除性或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是臨床治療NF1的潛在靶向藥物�？傊�，本研究通過構(gòu)建NF1kd施萬細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，在藥效持久性和殺傷特異性方面，初步探討了不同MEK1/2抑制劑對NF1kd施萬細胞的作用差異，為神經(jīng)纖維瘤的靶向藥物選擇提供了實驗依據(jù)。
本文編號：3243661
【文章來源】：中國口腔頜面外科雜志. 2020,18(04)
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
沉默NF1表達的施萬細胞模型。A.shNF1-RSC96細胞株熒光密度觀察；B.NF1基因的mRNA水平檢測；C.NF1蛋白水平檢測；D.NF1敲減后RAS-MAPK通路變化
圖1 沉默NF1表達的施萬細胞模型。A.shNF1-RSC96細胞株熒光密度觀察；B.NF1基因的mRNA水平檢測；C.NF1蛋白水平檢測；D.NF1敲減后RAS-MAPK通路變化目前已用于腫瘤治療的MEK抑制劑種類較多，由于各種MEK抑制劑的分子結(jié)構(gòu)不同，存在對MEK位點的選擇性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，對各種腫瘤的臨床治療效果也各異。本研究使用慢病毒干擾載體構(gòu)建NF1基因低表達的RSC96施萬細胞系，模擬疾病狀態(tài)下NF1基因突變的功能下調(diào)。選用4種與Selumetinib作用位點相近的MEK1/2抑制劑，對比時間梯度和半數(shù)抑制濃度方面的藥效差異。實驗結(jié)果顯示，5種MEK抑制劑均能抑制NF1kd施萬細胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h時仍有顯著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h時抑制效果明顯減弱。半數(shù)抑制濃度實驗中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的藥物濃度抑制NF1kd細胞增殖，有效區(qū)分了對照組細胞和NF1kd組細胞，組間差異明顯，表現(xiàn)出殺傷腫瘤細胞的敏感性。綜合實驗結(jié)果，Cobimetinib不僅具有長效的抑制作用，同時具有特異性殺傷NF1kd施萬細胞的能力，有一定的潛在治療優(yōu)勢。但是，以MEK為靶點的藥物一般會導致皮疹、肌酸激酶升高、心臟射血分數(shù)下降等副作用。在既往臨床研究中，Trametinib發(fā)生的3～4級不良事件為皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血壓（26/211）等[20];Binimetinib發(fā)生的3～4級不良事件為痤瘡樣皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹瀉（4/71）、小腸穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib單獨用藥時耐受較好，發(fā)生的3～4級不良事件為腹瀉（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批準聯(lián)合Vemurafenib治療BRAF V600E或V600K突變陽性、不可切除性或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是臨床治療NF1的潛在靶向藥物。
目前已用于腫瘤治療的MEK抑制劑種類較多，由于各種MEK抑制劑的分子結(jié)構(gòu)不同，存在對MEK位點的選擇性及上、下游RAF、ERK等敏感性不同，對各種腫瘤的臨床治療效果也各異。本研究使用慢病毒干擾載體構(gòu)建NF1基因低表達的RSC96施萬細胞系，模擬疾病狀態(tài)下NF1基因突變的功能下調(diào)。選用4種與Selumetinib作用位點相近的MEK1/2抑制劑，對比時間梯度和半數(shù)抑制濃度方面的藥效差異。實驗結(jié)果顯示，5種MEK抑制劑均能抑制NF1kd施萬細胞的增殖活性。其中，PD0325901、Cobimetinib、Trametinib在72 h時仍有顯著抑制效果，而Selumetini和Binimetinib在72 h時抑制效果明顯減弱。半數(shù)抑制濃度實驗中，Cobimetinib和Binimetnib以更低的藥物濃度抑制NF1kd細胞增殖，有效區(qū)分了對照組細胞和NF1kd組細胞，組間差異明顯，表現(xiàn)出殺傷腫瘤細胞的敏感性。綜合實驗結(jié)果，Cobimetinib不僅具有長效的抑制作用，同時具有特異性殺傷NF1kd施萬細胞的能力，有一定的潛在治療優(yōu)勢。但是，以MEK為靶點的藥物一般會導致皮疹、肌酸激酶升高、心臟射血分數(shù)下降等副作用。在既往臨床研究中，Trametinib發(fā)生的3～4級不良事件為皮疹（16/211）、疲倦（8/211）、高血壓（26/211）等[20];Binimetinib發(fā)生的3～4級不良事件為痤瘡樣皮炎（4/71）、肌酸磷酸激酶升高（14/71）、腹瀉（4/71）、小腸穿孔（1/71)[21]。Cobimetinib單獨用藥時耐受較好，發(fā)生的3～4級不良事件為腹瀉（7/97）、皮疹（6/97）、疲倦（5/97)[22],2015年被FDA批準聯(lián)合Vemurafenib治療BRAF V600E或V600K突變陽性、不可切除性或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。因此，Cobimetinib可能是臨床治療NF1的潛在靶向藥物�？傊�，本研究通過構(gòu)建NF1kd施萬細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，在藥效持久性和殺傷特異性方面，初步探討了不同MEK1/2抑制劑對NF1kd施萬細胞的作用差異，為神經(jīng)纖維瘤的靶向藥物選擇提供了實驗依據(jù)。
本文編號：3243661
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3243661.html
最近更新
教材專著
