川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）是傘形科蒿本屬植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort根莖中分離提純的一種生物堿為中藥川芎的有效活性成分之一。目前已有很多文獻(xiàn)報(bào)道TMP具有逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的活性,但由于甲基易被氧化而導(dǎo)致其半衰期短、生物利用度低,限制其臨床應(yīng)用。為了克服其缺點(diǎn),我們合成了一系列川芎嗪芪類衍生物并篩選出具有較好活性的DLJ14（（E）-2-（2,4,-二甲氧基苯乙烯基）-3,5,6-三甲基吡嗪）。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)證實(shí)：DLJ14能逆轉(zhuǎn)人慢性粒細(xì)胞性白血病耐阿霉素細(xì)胞株K562/A02和人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞株MCF-7/A對(duì)阿霉素的耐藥性。但是,DLJ14和阿霉素合用后提高阿霉素抗腫瘤作用的機(jī)制并沒有完全闡明。本課題將進(jìn)一步探討川芎嗪芪類衍生物DLJ14和阿霉素合用對(duì)人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞MCF-7/A體內(nèi)外增殖的抑制作用及作用機(jī)制。首先,體外MTT實(shí)驗(yàn)表明：DLJ14和阿霉素合用能明顯增強(qiáng)對(duì)MCF-7/A細(xì)胞的抑制作用,與阿霉素單用組比較有顯著性差異。體內(nèi)裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)表明：與陰性對(duì)照組相比,DLJ14單用（4mg/kg,8mg/k... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
前言
    1. 凋亡通路阻滯與MDR
        1.1. 內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑
        1.2. 外源性細(xì)胞凋亡途徑
        1.3. 內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑與外源性細(xì)胞凋亡途徑的相互聯(lián)系
    2. 細(xì)胞表面ABC超家族藥泵蛋白外排與MDR
實(shí)驗(yàn)材料
    1. 化合物
    2. 細(xì)胞株及其培養(yǎng)
    3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    4. 試劑
    5. 儀器設(shè)備
實(shí)驗(yàn)方法
    1. DLJ14和阿霉素合用對(duì)MCF-7/A細(xì)胞線粒體凋亡通路的影響
        1.1. 腫瘤細(xì)胞生長抑制實(shí)驗(yàn)
        1.2. 裸鼠皮下移植瘤生長抑制實(shí)驗(yàn)
        1.3. Hoechst 33258染色實(shí)驗(yàn)
        1.4. Annexin-FITCV/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        1.5. 細(xì)胞周期檢測
        1.6. 線粒體膜電位檢測
        1.7. 細(xì)胞線粒體蛋白和胞漿蛋白的分離提取
        1.8. Western blotting法檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2. DLJ14和阿霉素合用對(duì)MCF-7/A細(xì)胞中ABC超家族耐藥相關(guān)蛋白P-gp和BCRP的影響
        2.1. 羅丹明123的胞內(nèi)蓄積
        2.2. 細(xì)胞內(nèi)ATP含量檢測
        2.3. ATPase活性測定
        2.4. Western blotting法檢測P-gp和BCRP蛋白的表達(dá)
數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. DLJ14和阿霉素合用對(duì)MCF-7/A細(xì)胞線粒體凋亡通路的影響
        1.1. DLJ14增強(qiáng)阿霉素對(duì)耐阿霉素細(xì)胞株MCF-7/A體外生長的抑制作用
        1.2. DLJ14增強(qiáng)阿霉素對(duì)耐阿霉素細(xì)胞株MCF-7/A裸鼠體內(nèi)移植瘤生長的抑制作用
        1.3. DLJ14增強(qiáng)阿霉素對(duì)EGFR/PI3K/Akt細(xì)胞信號(hào)通路的抑制作用
        1.4. Hoechst 33258染色法檢測DLJ14與阿霉素合用誘導(dǎo)MCF-7/A細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化
        1.5. Annexin V-FITC/PI染色法檢測DLJ14與阿霉素合用誘導(dǎo)MCF-7/A細(xì)胞凋亡的作用
        1.6. DLJ14與阿霉素合用后影響MCF-7/A細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        1.7. DLJ14增強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)MCF-7/A細(xì)胞G2/M期阻滯作用
        1.8. DLJ14增強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)MCF-7/A細(xì)胞線粒體膜電位下降,促進(jìn)cytochrome c從線粒體釋放到胞漿
    2. DLJ14和阿霉素合用對(duì)MCF-7/A細(xì)胞中ABC超家族耐藥相關(guān)蛋白P-gp和BCRP表達(dá)的影響
        2.1. DLJ14和阿霉素合用增加羅丹明123的胞內(nèi)蓄積
        2.2. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細(xì)胞內(nèi)ATP含量
        2.3. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細(xì)胞中Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase活性
        2.4. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細(xì)胞中P-gp和BCRP蛋白的表達(dá)
        2.5. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細(xì)胞中ERK和P-ERK蛋白的表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3237957