發(fā)布時(shí)間：2021-06-12 02:23

　　目的:阿霉素（Doxorubicin,DOX）是一種廣泛使用的抗腫瘤藥物,但其對(duì)心臟產(chǎn)生副作用,因此在臨床應(yīng)用上受到一定的限制。已提出多種阿霉素誘導(dǎo)的不可逆性心肌損傷機(jī)制,包括活性氧產(chǎn)生,脂質(zhì)過(guò)氧化和線粒體功能障礙等。在這些病理因素中,線粒體功能障礙被認(rèn)為是阿霉素誘導(dǎo)心肌毒性的關(guān)鍵靶點(diǎn)。Parkin通過(guò)介導(dǎo)線粒體自噬參與對(duì)細(xì)胞內(nèi)受損線粒體的選擇性清除,對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和線粒體正常形態(tài)結(jié)構(gòu)具有重要作用。此外,YAP的靶蛋白為Parkin,并且越來(lái)越多的證據(jù)表明YAP（Yes-associated protein）與心臟發(fā)育、細(xì)胞增殖和心肌梗死等心臟疾病相關(guān),但是否與心肌毒性相關(guān)并沒(méi)有報(bào)道。因此,本研究旨在確定YAP/Parkin介導(dǎo)線粒體自噬是否調(diào)控阿霉素誘導(dǎo)的心肌毒性并探索其潛在機(jī)制。方法:6只8周齡健康純種雄性小鼠和6只8周齡健康的Parkin轉(zhuǎn)基因雄性小鼠,通過(guò)注射阿霉素制作心肌毒性機(jī)制的小鼠模型（模型組）,6只8周齡健康純種雄性小鼠和6只8周齡健康的Parkin轉(zhuǎn)基因雄性小鼠,通過(guò)注射生理鹽水作為對(duì)照組。通過(guò)TUNEL（terminal deoxinucleotidyl tr... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DOX在心肌細(xì)胞中誘導(dǎo)線粒體分裂和線粒體自噬（a-d）心肌細(xì)胞H9c2在DOX處理后誘導(dǎo)心肌毒性

圖 2 Parkin 調(diào)節(jié) DOX 誘導(dǎo)的線粒體分裂和線粒體自噬（a-b）用 2 μM DOX 處理心肌細(xì)胞 24 小時(shí)，分別通過(guò)免疫印跡和 RT-PCR 檢測(cè) Parkin 蛋白水平（a）和 mRNA 水平（b）。（c-g）用 Parkin 過(guò)表達(dá)腺病毒和對(duì)照β-gal 感染心肌細(xì)胞。感染 24 小時(shí)后，再用 2 μM DOX 處理細(xì)胞 24 小時(shí)。收集細(xì)胞用于檢測(cè) Parkin 表達(dá)水平（c）線粒體分裂（d）凋亡（e）自噬流（f）和 LC3 蛋白水平（g）。代表性照片顯示線粒體分裂（d，左）。藍(lán)色，DAPI 染色的細(xì)胞核; 紅色，MitoTracker 紅色 CMXRos 染色的線粒體。比例尺，10 μm。計(jì)數(shù)并總結(jié)了經(jīng)歷線粒體分裂的細(xì)胞百分比（d，右）。TUNEL 測(cè)定用于檢測(cè)凋亡細(xì)胞。比例尺，50 μm。此外，用腺病毒 RFP-GFP-LC3，Parkin 和β-gal 感染心肌細(xì)胞。在感染后 24 小時(shí)，再用2 μM DOX 處理細(xì)胞，然后在處理后 24 小時(shí)后，收集細(xì)胞用于檢測(cè)自噬通量（f，左）。比例尺，10 μm。（f，右）定量分析心肌細(xì)胞中的自噬體（AP;白色），自溶酶體（AL;黑色）和兩者（AP +AL;灰色）。（g）LC3II 蛋白水平用于檢測(cè)線粒體自噬。與對(duì)照組比較，數(shù)據(jù)表示為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值±SD,*P＜0.05。

17圖 3 Parkin 敲低對(duì) DOX 誘導(dǎo)的心臟毒性敏感性增強(qiáng)（a-e）使用 Parkin siRNA 的腺病毒感染心肌細(xì)胞，檢測(cè) Parkin 的表達(dá)水平（a），同時(shí)加入DOX（0.2 μM）觀察線粒體分裂（b）細(xì)胞凋亡（c）和 LC3II 蛋白水平（d）。 代表性的照片顯示線粒體分裂（b，左）。藍(lán)色，DAPI 染色的細(xì)胞核; 紅色，MitoTracker 紅色 CMXRos 染色的線粒體。比例尺，10 μm。計(jì)數(shù)并總結(jié)了經(jīng)歷線粒體分裂的細(xì)胞百分比（b，右）。TUNEL 測(cè)定用于檢測(cè)凋亡的細(xì)胞。比例尺，50 μm。（d）LC3II 蛋白水平用于檢測(cè)線粒體自噬。與對(duì)照組比較，數(shù)據(jù)表示為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值±SD,*P＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過(guò)表達(dá)前腦啡肽原（PPENK）增強(qiáng)線粒體自噬減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷[J]. 王艷,盧曉娥,趙品,姜靜,姚立農(nóng).  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017(10)
[2]An emerging role for Hippo-YAP signaling in cardiovascular development[J]. Jiliang Zhou.  The Journal of Biomedical Research. 2014(04)



本文編號(hào)：3225757