目的:阿霉素（Doxorubicin,DOX）是一種廣泛使用的抗腫瘤藥物,但其對心臟產(chǎn)生副作用,因此在臨床應(yīng)用上受到一定的限制。已提出多種阿霉素誘導(dǎo)的不可逆性心肌損傷機制,包括活性氧產(chǎn)生,脂質(zhì)過氧化和線粒體功能障礙等。在這些病理因素中,線粒體功能障礙被認為是阿霉素誘導(dǎo)心肌毒性的關(guān)鍵靶點。Parkin通過介導(dǎo)線粒體自噬參與對細胞內(nèi)受損線粒體的選擇性清除,對維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和線粒體正常形態(tài)結(jié)構(gòu)具有重要作用。此外,YAP的靶蛋白為Parkin,并且越來越多的證據(jù)表明YAP（Yes-associated protein）與心臟發(fā)育、細胞增殖和心肌梗死等心臟疾病相關(guān),但是否與心肌毒性相關(guān)并沒有報道。因此,本研究旨在確定YAP/Parkin介導(dǎo)線粒體自噬是否調(diào)控阿霉素誘導(dǎo)的心肌毒性并探索其潛在機制。方法:6只8周齡健康純種雄性小鼠和6只8周齡健康的Parkin轉(zhuǎn)基因雄性小鼠,通過注射阿霉素制作心肌毒性機制的小鼠模型（模型組）,6只8周齡健康純種雄性小鼠和6只8周齡健康的Parkin轉(zhuǎn)基因雄性小鼠,通過注射生理鹽水作為對照組。通過TUNEL（terminal deoxinucleotidyl tr... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DOX在心肌細胞中誘導(dǎo)線粒體分裂和線粒體自噬（a-d）心肌細胞H9c2在DOX處理后誘導(dǎo)心肌毒性

圖 2 Parkin 調(diào)節(jié) DOX 誘導(dǎo)的線粒體分裂和線粒體自噬（a-b）用 2 μM DOX 處理心肌細胞 24 小時，分別通過免疫印跡和 RT-PCR 檢測 Parkin 蛋白水平（a）和 mRNA 水平（b）。（c-g）用 Parkin 過表達腺病毒和對照β-gal 感染心肌細胞。感染 24 小時后，再用 2 μM DOX 處理細胞 24 小時。收集細胞用于檢測 Parkin 表達水平（c）線粒體分裂（d）凋亡（e）自噬流（f）和 LC3 蛋白水平（g）。代表性照片顯示線粒體分裂（d，左）。藍色，DAPI 染色的細胞核; 紅色，MitoTracker 紅色 CMXRos 染色的線粒體。比例尺，10 μm。計數(shù)并總結(jié)了經(jīng)歷線粒體分裂的細胞百分比（d，右）。TUNEL 測定用于檢測凋亡細胞。比例尺，50 μm。此外，用腺病毒 RFP-GFP-LC3，Parkin 和β-gal 感染心肌細胞。在感染后 24 小時，再用2 μM DOX 處理細胞，然后在處理后 24 小時后，收集細胞用于檢測自噬通量（f，左）。比例尺，10 μm。（f，右）定量分析心肌細胞中的自噬體（AP;白色），自溶酶體（AL;黑色）和兩者（AP +AL;灰色）。（g）LC3II 蛋白水平用于檢測線粒體自噬。與對照組比較，數(shù)據(jù)表示為三次獨立實驗的平均值±SD,*P＜0.05。

17圖 3 Parkin 敲低對 DOX 誘導(dǎo)的心臟毒性敏感性增強（a-e）使用 Parkin siRNA 的腺病毒感染心肌細胞，檢測 Parkin 的表達水平（a），同時加入DOX（0.2 μM）觀察線粒體分裂（b）細胞凋亡（c）和 LC3II 蛋白水平（d）。 代表性的照片顯示線粒體分裂（b，左）。藍色，DAPI 染色的細胞核; 紅色，MitoTracker 紅色 CMXRos 染色的線粒體。比例尺，10 μm。計數(shù)并總結(jié)了經(jīng)歷線粒體分裂的細胞百分比（b，右）。TUNEL 測定用于檢測凋亡的細胞。比例尺，50 μm。（d）LC3II 蛋白水平用于檢測線粒體自噬。與對照組比較，數(shù)據(jù)表示為三次獨立實驗的平均值±SD,*P＜0.05。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]過表達前腦啡肽原（PPENK）增強線粒體自噬減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷[J]. 王艷,盧曉娥,趙品,姜靜,姚立農(nóng).  細胞與分子免疫學雜志. 2017(10)
[2]An emerging role for Hippo-YAP signaling in cardiovascular development[J]. Jiliang Zhou.  The Journal of Biomedical Research. 2014(04)



本文編號：3225757