目的篩選最佳的體外原代心�。≒C）細(xì)胞代謝組學(xué)樣品預(yù)處理方法,對(duì)超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC/Q-TOF-MS）的色譜-質(zhì)譜條件優(yōu)化,為建立體外心肌毒性代謝組學(xué)研究方法奠定基礎(chǔ)。方法利用UPLC/Q-TOF-MS技術(shù),分別考察0.05%胰酶消化后冰甲醇提取和刮刀刮取后6種不同溶劑提取的心肌細(xì)胞樣品預(yù)處理方法,考察5種流動(dòng)相梯度洗脫方案和正、負(fù)離子檢測(cè)模式下的基峰離子流圖,利用質(zhì)量控制樣本（QC）進(jìn)行儀器精密度、方法精密度和樣本穩(wěn)定性試驗(yàn)等方法學(xué)考察。結(jié)果最佳的心肌細(xì)胞樣品預(yù)處理方法為:0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化后-80℃甲醇直接提取。最佳的流動(dòng)相洗脫程序?yàn)?0 min,2.0%A;2 min,25.0%A;6 min,40.0%A;12 min,90.0%A;保持2 min;16 min,2.0%A;保持2 min。最佳的質(zhì)譜檢測(cè)模式為:正離子模式。本方法的儀器精密度、方法精密度和樣本穩(wěn)定性試驗(yàn)以相對(duì)峰面積比值的RSD計(jì)分別為4.9%¹4.9%、8.6%¹7.8%和5.2%¹6.3%,以... 

【文章來(lái)源】：藥物評(píng)價(jià)研究. 2016,39(04)

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心肌細(xì)胞樣品預(yù)處理方法考察

568DrugEvaluationResearch第39卷第4期2016年8月3.2色譜條件中梯度洗脫程序的優(yōu)化利用“2.2.1”項(xiàng)方法制備的心肌細(xì)胞樣品在正離子模式下進(jìn)行梯度洗脫程序優(yōu)化，考察表1中的5種梯度洗脫程序，與其余4種梯度洗脫程序比較，程序5可獲得最多數(shù)目的特征峰，且其BPI圖中各特征峰分離度和峰形均較好，因此，選擇程序5為最佳洗脫程序。5種梯度洗脫程序的BPI圖見(jiàn)圖2。1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0100200300400006000080090010001100120013001400100160100200300400500600700800900100011001200130014001500160圖2UPLC/Q-TOF-MS梯度洗脫程序的選擇Fig.2GradientelutionprogramselectionforUPLC/Q-TOF-MS1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min程序1程序2程序3程序4程序5

DrugEvaluationResearch第39卷第4期2016年8月5693.3質(zhì)譜條件中正負(fù)檢測(cè)模式的選擇在梯度洗脫程序4的條件下，考察“2.2.1”項(xiàng)方法制備的心肌細(xì)胞樣品在正、負(fù)離子模式檢測(cè)下的出峰情況，結(jié)果顯示，在正離子模式下檢測(cè)到了＞20個(gè)特征峰，而負(fù)離子模式只檢測(cè)到了少數(shù)幾個(gè)特征峰。因此，統(tǒng)一采用正離子模式檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)圖3。3.4方法學(xué)考察結(jié)果6個(gè)穩(wěn)定出現(xiàn)的較大共有獨(dú)立峰色譜圖見(jiàn)圖4。儀器精密度中相對(duì)峰面積比值的RSD為4.9%～14.9%，保留時(shí)間的RSD均小于1.0%，表明儀器精密度良好；方法精密度中相對(duì)峰面積比值的RSD為8.6%～17.8%，保留時(shí)間的RSD均小于1.0%，表明方法精密度良好；樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)中相對(duì)峰面積比值的RSD為5.2%～16.3%，保留時(shí)間的RSD均小于1.0%，表明樣品在48h內(nèi)穩(wěn)定，所以每批樣品應(yīng)保證在2d內(nèi)測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。圖3質(zhì)譜檢測(cè)離子模式選擇Fig.3Ionmodeselectionformassspectrometrydetection圖4方法學(xué)考察所用的6個(gè)色譜峰Fig.4Sixchromatographicpeaksindicatedinmethodologicalevaluation表2儀器精密度、方法精密度和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5)Table2Resultsofinstrumentprecision,methodprecision,andstabilitytests(n=5)分子離子峰相對(duì)峰面積保留時(shí)間儀器精密度RSD/%方法精密度RSD/%穩(wěn)定性RSD/%儀器精密度RSD/%方法精密度RSD/%穩(wěn)定性RSD/%峰A4.910.515.30.30.30.4峰B6.59.19.20.30.30.2峰C10.39.215.00.20.20.2峰D8.58.65.20.10.10.1峰E13.017.812.70.10.10.1峰F14.910.916.30.10.10.11.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/minES+ES1.002.003.004.005.006.007.008.

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3217400