目的篩選最佳的體外原代心�。≒C）細胞代謝組學樣品預處理方法,對超高效液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術（UPLC/Q-TOF-MS）的色譜-質(zhì)譜條件優(yōu)化,為建立體外心肌毒性代謝組學研究方法奠定基礎。方法利用UPLC/Q-TOF-MS技術,分別考察0.05%胰酶消化后冰甲醇提取和刮刀刮取后6種不同溶劑提取的心肌細胞樣品預處理方法,考察5種流動相梯度洗脫方案和正、負離子檢測模式下的基峰離子流圖,利用質(zhì)量控制樣本（QC）進行儀器精密度、方法精密度和樣本穩(wěn)定性試驗等方法學考察。結果最佳的心肌細胞樣品預處理方法為:0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化后-80℃甲醇直接提取。最佳的流動相洗脫程序為:0 min,2.0%A;2 min,25.0%A;6 min,40.0%A;12 min,90.0%A;保持2 min;16 min,2.0%A;保持2 min。最佳的質(zhì)譜檢測模式為:正離子模式。本方法的儀器精密度、方法精密度和樣本穩(wěn)定性試驗以相對峰面積比值的RSD計分別為4.9%¹4.9%、8.6%¹7.8%和5.2%¹6.3%,以... 

【文章來源】：藥物評價研究. 2016,39(04)

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心肌細胞樣品預處理方法考察

568DrugEvaluationResearch第39卷第4期2016年8月3.2色譜條件中梯度洗脫程序的優(yōu)化利用“2.2.1”項方法制備的心肌細胞樣品在正離子模式下進行梯度洗脫程序優(yōu)化，考察表1中的5種梯度洗脫程序，與其余4種梯度洗脫程序比較，程序5可獲得最多數(shù)目的特征峰，且其BPI圖中各特征峰分離度和峰形均較好，因此，選擇程序5為最佳洗脫程序。5種梯度洗脫程序的BPI圖見圖2。1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0100200300400006000080090010001100120013001400100160100200300400500600700800900100011001200130014001500160圖2UPLC/Q-TOF-MS梯度洗脫程序的選擇Fig.2GradientelutionprogramselectionforUPLC/Q-TOF-MS1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min程序1程序2程序3程序4程序5

DrugEvaluationResearch第39卷第4期2016年8月5693.3質(zhì)譜條件中正負檢測模式的選擇在梯度洗脫程序4的條件下，考察“2.2.1”項方法制備的心肌細胞樣品在正、負離子模式檢測下的出峰情況，結果顯示，在正離子模式下檢測到了＞20個特征峰，而負離子模式只檢測到了少數(shù)幾個特征峰。因此，統(tǒng)一采用正離子模式檢測。結果見圖3。3.4方法學考察結果6個穩(wěn)定出現(xiàn)的較大共有獨立峰色譜圖見圖4。儀器精密度中相對峰面積比值的RSD為4.9%～14.9%，保留時間的RSD均小于1.0%，表明儀器精密度良好；方法精密度中相對峰面積比值的RSD為8.6%～17.8%，保留時間的RSD均小于1.0%，表明方法精密度良好；樣品穩(wěn)定性試驗中相對峰面積比值的RSD為5.2%～16.3%，保留時間的RSD均小于1.0%，表明樣品在48h內(nèi)穩(wěn)定，所以每批樣品應保證在2d內(nèi)測定。結果見表2。圖3質(zhì)譜檢測離子模式選擇Fig.3Ionmodeselectionformassspectrometrydetection圖4方法學考察所用的6個色譜峰Fig.4Sixchromatographicpeaksindicatedinmethodologicalevaluation表2儀器精密度、方法精密度和穩(wěn)定性實驗結果(n=5)Table2Resultsofinstrumentprecision,methodprecision,andstabilitytests(n=5)分子離子峰相對峰面積保留時間儀器精密度RSD/%方法精密度RSD/%穩(wěn)定性RSD/%儀器精密度RSD/%方法精密度RSD/%穩(wěn)定性RSD/%峰A4.910.515.30.30.30.4峰B6.59.19.20.30.30.2峰C10.39.215.00.20.20.2峰D8.58.65.20.10.10.1峰E13.017.812.70.10.10.1峰F14.910.916.30.10.10.11.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/min1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00t/minES+ES1.002.003.004.005.006.007.008.

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3217400