金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是一種重要的食源性條件致病菌,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致致命感染。隨著抗生素大量不合理使用,多重耐藥金黃色葡萄球菌不斷出現(xiàn),對(duì)食品安全及人畜健康造成嚴(yán)重威脅。本研究以分離自養(yǎng)殖場(chǎng)以及臨床上的多重耐藥S.aureus為研究對(duì)象,研究S.aureus的抗生素耐藥種類和耐藥程度;利用PCR法研究S.aureus中β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、林可酰胺、大環(huán)內(nèi)酯類和氨基糖苷類抗生素的耐藥基因以及多藥外排泵基因norA的分布情況;并通過(guò)體外生長(zhǎng)活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)了解舍曲林及其聯(lián)合抗生素使用對(duì)S.aureus體外抑菌及殺菌情況;分別采用結(jié)晶紫染色法和甲醇提取法研究舍曲林對(duì)S.aureus生物被膜和葡萄球菌黃素形成能力的影響;最后通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）研究舍曲林對(duì)S.aureus相關(guān)耐藥基因和毒力基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果如下:（1）分離自養(yǎng)殖場(chǎng)的5株S.aureus菌株至少對(duì)7種抗生素耐藥,包括β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、林可酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類和氨基糖苷類抗生素。且最低抑菌濃度（MIC）均遠(yuǎn)超出... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫表
第一章 緒論
    1.1 金黃色葡萄球菌
        1.1.1 金黃色葡萄球菌的生物特性
        1.1.2 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌
        1.1.3 金黃色葡萄球菌的流行性危害
        1.1.4 金黃色葡萄球菌生物被膜的形成
        1.1.5 金黃色葡萄球菌黃素
        1.1.6 金黃色葡萄球菌毒力因子表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)
    1.2 抗生素
        1.2.1 抗生素耐藥性
    1.3 非抗生素(non-antibiotics)
        1.3.1 非抗生素抑菌作用機(jī)制
        1.3.2 5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs):舍曲林
    1.4 治療細(xì)菌耐藥的策略
    1.5 本課題的研究意義及主要內(nèi)容
第二章 金黃色葡萄球菌耐藥性分析
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        2.3.2 K-B紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)
        2.3.3 最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定
        2.3.4 DNA提取及引物合成
        2.3.5 PCR基因擴(kuò)增
        2.3.6 PCR產(chǎn)物電泳驗(yàn)證
        2.3.7 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 藥敏紙片結(jié)果
        2.4.2 最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定結(jié)果
        2.4.3 耐藥基因檢測(cè)結(jié)果
    2.5 本章小結(jié)
第三章 舍曲林對(duì)金黃色葡萄球菌耐藥性的影響
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑耗材
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 棋盤法聯(lián)合抑菌試驗(yàn)
        3.3.2 舍曲林對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)活力的影響
        3.3.3 時(shí)間-殺菌曲線
        3.3.4 RNA提取及c DNA模板制備
        3.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)
        3.3.6 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 聯(lián)合抑菌試驗(yàn)結(jié)果
        3.4.2 舍曲林對(duì)金黃色葡萄球菌活力的影響
        3.4.3 舍曲林與四環(huán)素聯(lián)用時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌的殺菌作用
        3.4.4 舍曲林對(duì)norA和 mec A耐藥基因表達(dá)的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 舍曲林對(duì)金黃色葡萄球菌毒力因子的影響
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑耗材
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 金黃色葡萄球菌生物被膜測(cè)定
        4.3.2 葡萄球菌黃素測(cè)定
        4.3.3 β-半乳糖苷酶測(cè)定
        4.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)
        4.3.5 數(shù)據(jù)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 生物被膜測(cè)定結(jié)果
        4.4.2 葡萄球菌黃素測(cè)定結(jié)果
        4.4.3 β-半乳糖苷酶測(cè)定結(jié)果
        4.4.4 舍曲林對(duì)毒力基因表達(dá)的影響
    4.5 結(jié)果討論
    4.6 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、創(chuàng)新點(diǎn)
    三、展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]食品中金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)方法研究[D]. 張超楠.吉林大學(xué) 2012
[3]PCR技術(shù)檢測(cè)肉及肉制品中金黃色葡萄球菌研究[D]. 劉景武.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3207055