發(fā)布時間：2021-05-22 18:05

　　酶固定化過程中,酶分子能與載體發(fā)生共價偶聯(lián)引起酶失活。為了保持酶分子的活性構(gòu)象,同時使酶固定更加牢固,我們在磁性微球載體表面設(shè)計了二硫鍵封裝的“鳥籠”結(jié)構(gòu)進(jìn)行酶的固定化研究。首先需要我們制備出聚乙烯亞胺（PEI）接枝的聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）磁性微球,然后加入3-（2-吡啶二巰基）丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯（SPDP）改性接枝的PEI,然后通過電荷引力誘捕吸附脂肪酶,最后用2,2-（1,2-乙二基雙氧代）雙乙硫醇（DMDO）交聯(lián)SPDP,由此將酶包封固定化。主要內(nèi)容包括以下幾個部分:第一,磁性微球的合成、接枝修飾、交聯(lián)封裝及其表征。首先通過共沉淀法（化學(xué)法）制備出油酸進(jìn)行改性的Fe₃O₄磁粒子,以其為磁核（Fe₃O₄磁粒子）,采用懸浮聚合法合成了PMMA磁性微球,并對微球進(jìn)行了酯解酸化使其攜帶羧基。滴定分析結(jié)果顯示微球表面攜帶的羧基含量為0.49 mmol/g。然后將PEI接枝在微球表面制備出PEI@PMMA磁性微球,分析表明微球表面伯氨基的含量為53.3μmol/g。進(jìn)而用SPDP修飾PEI制備... 

【文章來源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 磁性高分子微球概要
        1.1.1 磁性高分子微球的定義及優(yōu)勢
        1.1.2 磁性聚合高分子微球的制備
        1.1.3 磁性高分子微球的應(yīng)用
    1.2 二硫鍵及其應(yīng)用
        1.2.1 二硫鍵概述
        1.2.2 二硫鍵的應(yīng)用
    1.3 酶的固定化
        1.3.1 固定化酶的概述
        1.3.2 固定化酶的方法
    1.4 蛋白質(zhì)構(gòu)象
        1.4.1 蛋白質(zhì)構(gòu)象概述
        1.4.2 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
        1.4.3 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)測定
    1.5 本文研究內(nèi)容
第二章 PEI@PMMA磁性微球修飾、交聯(lián)封裝及其表征
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 試劑及儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 微球表面羧基的含量測定
        2.3.2 對硝基苯甲醛標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        2.3.3 SPDP-PEI@PMMA上伯氨基的含量檢測
        2.3.4 SPDP-PEI@PMMA定性
        2.3.5 交聯(lián)封裝上的SPDP與DMDO的紫外定量檢測
    2.4 本章小結(jié)
第三章 SPDP-PEI@PMMA磁性微球交聯(lián)封裝固定化脂肪酶
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 試劑及儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)部分
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 酶活檢測
        3.3.2 交聯(lián)時間對微球交聯(lián)包封固定CRL的影響
        3.3.3 交聯(lián)溫度對微球交聯(lián)包封固定CRL的影響
        3.3.4 靜電引力誘捕吸附脂肪酶固載量及酶活
        3.3.5 交聯(lián)封裝固定化酶固載量及酶活
        3.3.6 熒光表征交聯(lián)封裝固定化酶
        3.3.7 高鹽洗脫
        3.3.8 紅外光譜解析蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)
    3.4 本章小結(jié)
第四章 磁性微球交聯(lián)封裝固定化酶的性能研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 試劑及儀器
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 固定化CRL最適溫度的考察
        4.3.2 固定化CRL最適pH的考察
        4.3.3 固定化CRL熱穩(wěn)定性的考察
        4.3.4 變性劑對固定化CRL酶的影響
        4.3.5 固定化CRL的重復(fù)使用性
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 工作展望
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]磁性微球表面交聯(lián)封裝固定化酶及其催化性能研究[D]. 夏玉佩.河北大學(xué) 2019
[2]免疫磁性納米粒子的制備及在分離CD34+細(xì)胞中的應(yīng)用[D]. 趙麗娜.上海師范大學(xué) 2008
[3]磁性高分子微球的制備與表征[D]. 蔡青.四川大學(xué) 2007



本文編號：3201439