目的:探索苯海索（trihexyphenidyl,THP）對(duì)氧糖剝奪（oxygen glucose deprivation,OGD）后體外血腦屏障（blood brain barrier,BBB）上P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）變化的影響及機(jī)制研究。方法:（1）原代培養(yǎng)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（rat brain microvascular endothelial cells,r BMECs）和星形膠質(zhì)細(xì)胞,免疫熒光染色法鑒別r BMECs;采用MTT法檢測(cè)不同時(shí)間OGD對(duì)r BMECs的細(xì)胞存活率影響,通過Transwell建立共培養(yǎng)體系模擬體外BBB,每天監(jiān)測(cè)共培養(yǎng)體系跨膜電阻值（transendothelial electrical resistance,TEER）,待其達(dá)到穩(wěn)定后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);通過測(cè)定由內(nèi)室到外室熒光素鈉（fluorescein sodium,Na F）轉(zhuǎn)運(yùn)的表觀滲透系數(shù)（apparent permeability coefficient,Papp）研究不同時(shí)間OGD損傷r BMECs后對(duì)BBB緊密連接的影響;再分別測(cè)定共培養(yǎng)體系羅丹明123（... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 體外血腦屏障損傷模型的建立
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        2.3 主要儀器
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 r BMECs和星形膠質(zhì)細(xì)胞的提取、分離及培養(yǎng)
        3.2 免疫熒光染色法鑒別r BMECs
        3.3 不同時(shí)間OGD對(duì) r BMECs的損傷
        3.4 體外BBB模型的建立
        3.5 不同時(shí)間OGD損傷r BMECs對(duì)共培養(yǎng)體系由內(nèi)室到外室Na F轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
        3.6 不同時(shí)間OGD損傷r BMECs對(duì)共培養(yǎng)體系Rh123 轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
        3.7 Western Blot檢測(cè)OGD損傷后r BMECs上 P-gp的表達(dá)
        3.8 免疫熒光染色法檢測(cè)OGD損傷后對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活
        3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 結(jié)果
        4.1 r BMECs的純化與鑒別
        4.2 體外BBB模型的建立
        4.3 不同時(shí)間OGD對(duì) r BMECs的活力影響
        4.4 不同時(shí)間OGD損傷r BMECs對(duì)共培養(yǎng)體系由內(nèi)室到外室Na F轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
        4.5 不同時(shí)間OGD損傷r BMECs對(duì)共培養(yǎng)體系Rh123 轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
        4.6 Western Blot檢測(cè)OGD損傷后r BMECs上 P-gp的表達(dá)
        4.7 免疫熒光染色法檢測(cè)OGD損傷后對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活
    5 討論
    6 小結(jié)
第二章 THP對(duì) OGD后體外血腦屏障上P-gp的影響
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        2.2 主要儀器
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 r BMECs和星形膠質(zhì)細(xì)胞的提取、分離及培養(yǎng)
        3.2 THP對(duì) r BMECs細(xì)胞活力的影響
        3.3 THP對(duì) OGD損傷后r BMECs細(xì)胞存活率的影響
        3.4 THP對(duì) OGD損傷后r BMECs細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
        3.5 體外BBB模型的構(gòu)建
        3.6 THP對(duì) OGD損傷后共培養(yǎng)體系由內(nèi)室到外室Na F轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
        3.7 THP對(duì) OGD損傷后共培養(yǎng)體系Rh123 轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
        3.8 Western Blot檢測(cè)THP對(duì) OGD損傷后r BMECs上 P-gp蛋白表達(dá)的影響
        3.9 THP對(duì) OGD損傷后r BMECs內(nèi)的氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的影響
        3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 結(jié)果
        4.1 THP對(duì) r BMECs的細(xì)胞毒性測(cè)定
        4.2 THP提高OGD損傷后r BMECs細(xì)胞存活率
        4.3 THP改善OGD損傷后r BMECs細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        4.4 THP降低OGD損傷后共培養(yǎng)體系由內(nèi)室到外室Na F的轉(zhuǎn)運(yùn)
        4.5 THP改善OGD損傷后共培養(yǎng)體系Rh123 的轉(zhuǎn)運(yùn)
        4.6 THP抑制OGD損傷后r BMECs上 P-gp蛋白表達(dá)
        4.7 THP對(duì) OGD損傷后r BMECs內(nèi)的氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定
    5 討論
    6 小結(jié)
第三章 THP對(duì) OGD后體外血腦屏障上P-gp影響的機(jī)制研究
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        2.2 主要儀器
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 免疫熒光法檢測(cè)THP對(duì) OGD損傷后r BMECs緊密連接和P-gp相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.2 Western Blot檢測(cè)THP對(duì) OGD損傷后r BMECs緊密連接和P-gp相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.3 各因子抑制劑對(duì)r BMECs細(xì)胞活力的影響
        3.4 Western Blot檢測(cè)各抑制劑對(duì)r BMECs內(nèi) P-gp相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 THP對(duì) OGD后體外血腦屏障結(jié)構(gòu)損傷的修復(fù)作用
        4.2 THP抑制OGD損傷后r BMECs上 P-gp相關(guān)蛋白的表達(dá)
        4.3 各因子抑制劑對(duì)r BMECs細(xì)胞活力的影響
        4.4 THP對(duì) OGD后體外血腦屏障上P-gp的作用調(diào)節(jié)機(jī)制
    5 討論
    6 小結(jié)
文獻(xiàn)綜述:P-糖蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用研究
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]苯海索對(duì)局灶性腦缺血-再灌注大鼠大腦皮質(zhì)Ca2+含量、海馬c-fos、c-sis基因表達(dá)的影響[J]. 謝松強(qiáng),楊保華,姬汴生,胡香杰,張貴卿.  中南藥學(xué). 2004(05)
[2]苯海索對(duì)培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸興奮毒性的保護(hù)作用[J]. 姬汴生,高遠(yuǎn),劉紅,胡香杰,張貴卿.  中國(guó)藥學(xué)雜志. 2002(09)



本文編號(hào)：3187341