人腸道病毒68型（EV-D68）是腸道病毒D組成員,被發(fā)現(xiàn)與多種疾病有關(guān),主要引起呼吸系統(tǒng)疾病及神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥。近十年來,在全球多個國家和地區(qū)頻繁報道EV-D68的爆發(fā)流行。目前對感染EV-D68患者的主要治療手段為支持性治療,沒有針對病毒的特效治療藥物,也沒有疫苗預(yù)防EV-D68的爆發(fā)。腸道病毒與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）是細(xì)胞凋亡發(fā)生的重要蛋白,其中Caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶。那么EV-D68是否通過Caspase通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,其機制怎樣?與宿主細(xì)胞的相互作用關(guān)系怎樣?Caspase-3抑制劑（Z-DEVD-FMK）是否還能起到抑制病毒增殖的作用?本研究即致力于說明這些問題。實驗方法:首先,探討EV-D68導(dǎo)致的細(xì)胞病變效應(yīng)是否為凋亡,以RD細(xì)胞作為觀察對象,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、Hoechst核染色、PI染色、DNA ladder、Western Blot等分析發(fā)生病變效應(yīng)時的細(xì)胞狀態(tài)、DNA降解的特征以及細(xì)胞內(nèi)病毒蛋白vp1和活性Caspase-3蛋白表達(dá)情況。然后,分析Caspase-3抑制劑對感染EV-D68的... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
前言
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 腸道病毒EV-D68
        1.1.1 腸道病毒及EV-D68背景簡介
        1.1.2 EV-D68的生物學(xué)特性
        1.1.3 EV-D68的流行病學(xué)特點
        1.1.4 EV-D68的臨床表現(xiàn)及預(yù)防、診斷和治療現(xiàn)狀
        1.1.5 小結(jié)
    1.2 細(xì)胞凋亡
        1.2.1 細(xì)胞凋亡的定義
        1.2.2 細(xì)胞凋亡的分子機制
        1.2.3 細(xì)胞凋亡與Caspase
        1.2.4 小結(jié)
    1.3 細(xì)胞凋亡與病毒感染
        1.3.1 宿主通過細(xì)胞凋亡防御病毒
        1.3.2 病毒通過細(xì)胞凋亡促進(jìn)自身復(fù)制
        1.3.3 腸道病毒誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡的研究現(xiàn)狀
        1.3.4 小結(jié)
第2章 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞株及病毒
        2.1.2 主要實驗儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要抗體
        2.1.5 引物
        2.1.6 試液配方
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗設(shè)計及分組
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)、計數(shù)及觀察
        2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
        2.2.4 病毒擴(kuò)增及滴度測定
        2.2.5 Caspase-3/8/9抑制劑、Caspase-3激活劑干預(yù)宿主細(xì)胞
        2.2.6 Caspase活性測定
        2.2.7 凝膠電泳和免疫印跡(Western Blot)
        2.2.8 實時熒光定量PCR（RT-qPCR）
        2.2.9 瓊脂糖凝膠電泳測定DNA梯度化（DNA ladder）
        2.2.10 統(tǒng)計分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 EV-D68感染RD細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
    3.2 Caspase-3抑制劑(Z-DEVD-FMK)緩解EV-D68引起的細(xì)胞病變、G0/G1期阻滯以及Caspase-3的激活
        3.2.1 Caspase-3抑制劑處理RD細(xì)胞的操作流程
        3.2.2 Caspase-3抑制劑緩解EV-D68引起的細(xì)胞病變效應(yīng)
        3.2.3 Caspase-3抑制劑逆轉(zhuǎn)EV-D68引起的宿主細(xì)胞G0/G1阻滯
        3.2.4 Caspase-3抑制劑抑制EV-D68激活的宿主細(xì)胞Caspase-3活性及蛋白表達(dá)
    3.3 Caspase-3抑制劑可減少EV-D68病毒粒子的產(chǎn)生
        3.3.1 Caspase-3抑制劑對EV-D68進(jìn)入宿主細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)病毒基因組復(fù)制無影響
        3.3.2 Caspase-3抑制劑影響EV-D68后期成熟
    3.4 Caspase-3激活劑可增加EV-D68病毒粒子的產(chǎn)生
    3.5 RD細(xì)胞中激活的Caspase-3被EV-D68用于自身的擴(kuò)增
    3.6 感染EV-D68激活Caspase-3是通過激活上游Caspase-8和Caspase-9 實現(xiàn)的
    3.7 EV-D68在RD及 293T細(xì)胞系中可引起細(xì)胞病變效應(yīng),而在Vero和MRC5細(xì)胞系中無影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
作者簡介及碩士期間取得的成果
致謝



本文編號：3164532