目的建立脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）損傷模型,研究Rho A/ROCK信號通路及二苯乙烯苷（Tetrahydroxystilbene glucoside,TSG）干預(yù)在LPS誘導內(nèi)皮細胞損傷中的作用。方法購買人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVECs）貼壁培養(yǎng)。采用MTT法、流式細胞儀及LDH（乳酸脫氫酶）檢測試劑盒篩選出LPS誘導內(nèi)皮細胞損傷的最佳作用時間和濃度。采用正常組（Control）、TSG單獨處理組（100μM,24 h）、模型組（100μg/ml LPS,作用24 h）、TSG（10、25、50、100μM）預(yù)處理24 h+LPS處理組（TSG預(yù)處理24 h后,加入終濃度為100μg/ml LPS作用24h）,應(yīng)用MTT法檢測細胞存活率,PI/Annexin V-FITC雙染色通過流式細胞儀檢測細胞凋亡,LDH檢測試劑盒測定LDH的釋放,免疫熒光技術(shù)檢測F-actin的形態(tài)和分布,應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測Ras同源基因家族成員A（Ra... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 緒論
第二章 材料與方法
    2.1 研究資料及儀器設(shè)備
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 主要儀器與試劑
        2.1.3 主要溶液配制
    2.2 實驗流程與方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)與鑒定
        2.2.2 細胞凍存
        2.2.3 細胞復蘇
        2.2.4 實驗分組
        2.2.5 MTT法
        2.2.6 鬼筆環(huán)肽（Phalloidine）染色
        2.2.7 siRNA轉(zhuǎn)染
        2.2.8 蛋白樣品提取
        2.2.9 蛋白質(zhì)定量（BCA法）及配平
        2.2.10 WesternBlot
        2.2.11 AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測
        2.2.12 LDH釋放檢測
        2.2.13 統(tǒng)計學處理分析
第三章 結(jié)果
    3.1 內(nèi)皮細胞鑒定
    3.2 LPS對HUVECs細胞的毒性作用
        3.2.1 LPS降低內(nèi)皮細胞存活率
        3.2.2 LPS促進HUVECs的LDH釋放
        3.2.3 LPS促進HUVECs的凋亡
    3.3 TSG顯著抑制LPS誘導的HUVECs細胞毒性
        3.3.1 TSG顯著提高LPS誘導的內(nèi)皮細胞存活率的降低
        3.3.2 TSG顯著抑制LPS誘導的LDH釋放
        3.3.3 TSG顯著抑制LPS誘導的內(nèi)皮細胞凋亡
    3.4 TSG抑制LPS誘導的RhoA表達
    3.5 TSG顯著抑制LPS誘導的ROCK表達及活化
        3.5.1 TSG顯著抑制LPS誘導的ROCK表達
        3.5.2 TSG顯著抑制LPS誘導的ROCK活化
    3.6 干擾RhoA/ROCK通路可顯著降低LPS誘導的細胞毒性
        3.6.1 RhoA、ROCK1、ROCK2沉默的鑒定
        3.6.2 沉默RhoA/ROCK信號通路可顯著提升內(nèi)皮細胞存活率
        3.6.3 沉默RhoA/ROCK信號通路可顯著降低LPS誘導的LDH釋放
        3.6.4 沉默RhoA/ROCK信號通路可顯著降低LPS誘導的內(nèi)皮細胞凋亡
    3.7 沉默RhoA/ROCK信號通路可顯著改善LPS誘導的F-actin骨架形態(tài)變化
    3.8 TSG可顯著抑制LPS誘導的F-actin骨架改變
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
綜述 RhoA/ROCK信號通路及與內(nèi)皮功能障礙
    參考文獻
英文縮寫詞表
致謝



本文編號：3160864