炭樣小單孢菌JXNU-1（M.carbonacea JXNU-1）是實驗室前期由瑤湖農(nóng)田土壤樣品中分離出的一株稀有放線菌,它可以產(chǎn)生一種核苷類的廣譜抗生素JX,其基因簇P450為抗生素JX合成相關(guān)基因簇,但它的具體功能仍不清楚基因敲除是常用的基因功能研究手段,它通過移除目的基因構(gòu)建基因缺失菌株,通過比較基因缺失菌株與野生型菌株的表現(xiàn)型差異研究目的基因的功能。本文通過構(gòu)建基因簇P450缺失突變株炭樣小單孢菌JXNU-ΔP450以及回復(fù)突變株炭樣小單孢菌JXNU-re,研究基因簇P450在炭樣小單孢菌JXNU-1產(chǎn)抗生素JX的生物合成中的作用,具體過程和結(jié)果如下:1.以溫敏型質(zhì)粒pKC1139作為模板,導(dǎo)入炭樣小單孢菌JXNU-1目的基因上下游片段作為同源交換臂以及質(zhì)粒pIJ790上氯霉素抗性標(biāo)記基因cat,成功構(gòu)建炭樣小單孢菌JXNU-1基因敲除載體pFD306,經(jīng)測序驗證后,通過電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入野生型炭樣小單孢菌JXNU-1受體菌,再通過抗性篩選、目的基因PCR擴增及擴增產(chǎn)物測序驗證,成功構(gòu)建基因缺失株炭樣小單孢菌JXNU-ΔP450,并通過PCR產(chǎn)物驗證以及測序驗證確定了目的基因簇的缺失。... 

【文章來源】：江西師范大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

同源重組技術(shù)替換目的基因Fig.1-1Replacedesirablegenebyhomologousrecombination

圖 1-2 鋅指蛋白結(jié)構(gòu)Fig.1-2 Structure of the zinc finger proteinNA、RNA 這類核酸結(jié)合，還能結(jié)合 DNA白或自身，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上調(diào)控基因

圖 1-4TALE蛋白結(jié)構(gòu)Fig.1-4 Structure of the TALE proteinTALE 識別 DNA 的機制在于不同的 RVD 能夠相對特異地分別識別 A、TC、G 4 種堿基中的一種。通過對天然 TALE 的研究發(fā)現(xiàn)，有 20 多種不同的 RVD

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3112958