細(xì)胞焦亡（Pyroptosis）是一種全新的程序性細(xì)胞死亡方式（Programmed cell death,PCD）。不同于細(xì)胞凋亡（Apoptosis）,細(xì)胞焦亡的過程伴隨著細(xì)胞內(nèi)容物釋放,是一種會(huì)促發(fā)炎癥的程序性壞死。經(jīng)典的細(xì)胞焦亡由炎癥性半胱氨酸天冬蛋白酶（Inflammatory caspases）介導(dǎo),包括半胱氨酸天冬蛋白酶-1/4/5/11（caspase-l/4/5/11）。病原微生物感染宿主時(shí),病原微生物來源的病原相關(guān)模式分子（Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）可以被宿主細(xì)胞的模式識(shí)別受體（Pattern recognition receptors,PRRs）所識(shí)別,進(jìn)而組裝成為炎癥小體（Inflammasome）,招募caspase-1使其自剪切而活化。細(xì)胞內(nèi)部的caspase-4/5/11可以直接結(jié)合革蘭氏陰性菌的脂多糖（LPS）而發(fā)生自身寡聚活化�；罨蟮腸aspase-1/4/5/11均可以切割共同底物gasdermin-D（GSDMD）。GSDMD的N端蛋白具有細(xì)胞膜打孔的功能。當(dāng)其全長(zhǎng)蛋白的鉸鏈區(qū)被活化... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

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摘要
Abstract
中英文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 細(xì)胞焦亡
        1.1.1 細(xì)胞焦亡現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 Caspase-1的激活機(jī)制
        1.1.3 Caspase-4/5/11的激活機(jī)制
    1.2 GSDMD
        1.2.1 GSDMD是細(xì)胞焦亡的執(zhí)行分子
        1.2.2 GSDMD是caspase-1/4/5/11的底物
        1.2.3 GSDMD的N端結(jié)構(gòu)域具有細(xì)胞膜打孔活性
    1.3 GSDME
        1.3.1 Gasdermin家族
        1.3.2 GSDME
    1.4 細(xì)胞凋亡
        1.4.1 細(xì)胞凋亡信號(hào)通路
        1.4.2 半胱氨酸天冬蛋白酶（caspase）
第二章 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 細(xì)胞系
        1.1.2 野生型小鼠
        1.1.3 Gsdme敲除小鼠
    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2.1 實(shí)驗(yàn)用藥物
        1.2.2 重組蛋白
        1.2.3 PCR試劑
        1.2.4 RNA提取及反轉(zhuǎn)錄試劑
        1.2.5 流式分析相關(guān)試劑
        1.2.6 其它實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
    1.3 抗體
        1.3.1 Western blot一抗
        1.3.2 Wetern blot二抗
    1.4 常用試劑配制
        1.4.1 TBS-T緩沖液
        1.4.2 SDS-PAGE電泳緩沖液
        1.4.3 半干轉(zhuǎn)緩沖液
        1.4.4 LB培養(yǎng)基（1L）
        1.4.5 2X YT培養(yǎng)基（1L）
    1.5 主要儀器設(shè)備
        1.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)儀器
        1.5.2 顯微鏡
        1.5.3 流式細(xì)胞分選儀
        1.5.4 其它常規(guī)儀器
    1.6 實(shí)驗(yàn)方法
        1.6.1 Spinning Disk顯微鏡拍攝
        1.6.2 Western blot
        1.6.3 大腸桿菌純化重組蛋白
        1.6.4 慢病毒系統(tǒng)制做穩(wěn)定表達(dá)特定基因的細(xì)胞系
        1.6.5 體外活性形式的caspases切割蛋白底物
        1.6.6 細(xì)胞死亡（Cell death）的檢測(cè)
        1.6.7 細(xì)胞存活（Cell survival）的檢測(cè)
        1.6.8 基因敲除細(xì)胞系的構(gòu)建
        1.6.9 siRNA介導(dǎo)的基因敲低
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
    3.1 GSDME將caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)化為細(xì)胞焦亡
        3.1.1 TNF誘導(dǎo)高表達(dá)GSDME的HeLa細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞焦亡
        3.1.2 化療藥物誘導(dǎo)高表達(dá)GSDME的HeLa細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞焦亡
        3.1.3 caspase-3切割GSDME引發(fā)細(xì)胞焦亡
        3.1.4 GSDME的表達(dá)量對(duì)細(xì)胞焦亡的影響
    3.2 caspase-3可以體外切割GSDME釋放其膜打孔活性
        3.2.1 caspase-3可以體外切割GSDME
        3.2.2 GSDME的N端結(jié)構(gòu)域可以結(jié)合磷脂
        3.2.3 GSDME的N端結(jié)構(gòu)域具有膜打孔活性
        3.2.4 GSDME耳聾突變體蛋白可以引起細(xì)胞焦亡
        3.2.5 GSDME耳聾突變體蛋白在細(xì)胞內(nèi)可以被快速降解
    3.3 化療藥物通過激活內(nèi)源GSDME引起細(xì)胞焦亡
        3.3.1 化療藥物可以引起高表達(dá)GSDME的癌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞焦亡
        3.3.2 化療藥物誘導(dǎo)癌細(xì)胞焦亡依賴于GSDME
        3.3.3 化療藥物激活caspase-3切割內(nèi)源的GSDME
    3.4 GSDME在腫瘤細(xì)胞里被沉默
        3.4.1 NCI-60里GSDME的表達(dá)情況
        3.4.2 化療藥物誘導(dǎo)NCI-H522發(fā)生GSDME依賴的細(xì)胞焦亡
    3.5 化療藥物通過GSDME引起原代細(xì)胞焦亡
        3.5.1 GSDME在原代細(xì)胞里高表達(dá)
        3.5.2 化療藥物可以引起高表達(dá)GSDME的原代細(xì)胞發(fā)生焦亡
        3.5.3 化療藥物可以引起原代細(xì)胞內(nèi)部的GSDME的切割
        3.5.4 化療藥物引起原代細(xì)胞焦亡依賴于GSDME
    3.6 caspase-3切割GSDME誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡在鼠源細(xì)胞上保守
        3.6.1 大多數(shù)鼠源的腫瘤細(xì)胞不表達(dá)GSDME
        3.6.2 GSDME介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡在鼠源細(xì)胞上同樣保守
        3.6.3 化療藥物引發(fā)機(jī)體副作用的小鼠模型
第四章 討論
    4.1 GSDME決定了caspase-3激活之后發(fā)生細(xì)胞凋亡還是細(xì)胞焦亡
    4.2 GSDME是化療副作用的關(guān)鍵分子
    4.3 GSDME在提高腫瘤免疫原性的應(yīng)用
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3051830