白介素-2（Interleukin-2,IL-2）是一種具有多功能免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子,由于在人體內(nèi)半衰期短因此在臨床應(yīng)用時(shí)受到限制。本研究室前期工作中,將人血清白蛋白（HSA）與人IL-2（HSA/IL-2）融合并先后在畢赤酵母、CHO細(xì)胞兩種表達(dá)體系中成功表達(dá)。畢赤酵母缺乏完善的翻譯后修飾功能,蛋白糖基化形式不完全,蛋白質(zhì)存在降解等問題。CHO細(xì)胞表達(dá)HSA/IL-2時(shí)在一定程度上解決了酵母表達(dá)體系的問題,且蛋白具有良好的生物活性,提高了HSA/IL-2的成藥性。但CHO細(xì)胞培養(yǎng)存在以下問題:（1）實(shí)驗(yàn)室前期使用的無血清培養(yǎng)基和流加培養(yǎng)基含多種蛋白成分,培養(yǎng)基性質(zhì)不穩(wěn)定,培養(yǎng)基不易保藏;（2）搖瓶培養(yǎng)規(guī)模小,不能滿足HSA/IL-2的后續(xù)研究及產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。本課題將以此為出發(fā)點(diǎn),篩選并優(yōu)化CHO細(xì)胞的培養(yǎng)基體系,并探究CHO細(xì)胞在攪拌式生物反應(yīng)器中的培養(yǎng)工藝。為解決培養(yǎng)基問題,考察了四種商業(yè)化無血清培養(yǎng)基的特性,完成細(xì)胞懸浮馴化。結(jié)合CHO細(xì)胞生長密度和活率,篩選出最優(yōu)基礎(chǔ)培養(yǎng)基M1。通過流加培養(yǎng)方式,篩選出最優(yōu)流加培養(yǎng)基F3。通過添加蛋白水解物（酵母提取物、大豆蛋白水解物、胰蛋白... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 白介素-2 概況
        1.1.1 人白介素-2
        1.1.2 人IL-2 分子結(jié)構(gòu)及其生物活性
        1.1.3 重組人IL-2 藥物現(xiàn)狀
        1.1.4 重組人IL-2 類似物的研究
        1.1.5 融合蛋白HSA/IL-2 的研究
    1.2 中國倉鼠卵巢細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)概況
        1.2.1 常用表達(dá)系統(tǒng)
        1.2.2 CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)
        1.2.3 CHO細(xì)胞生長方式
    1.3 哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)工藝研究
        1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)模式
        1.3.2 動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器
        1.3.3 CHO細(xì)胞培養(yǎng)過程中參數(shù)檢測(cè)及控制
    1.4 立題意義和研究內(nèi)容
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備
        2.1.4 培養(yǎng)基及溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 CHO細(xì)胞的培養(yǎng)與凍存
        2.2.2 CHO細(xì)胞的懸浮馴化
        2.2.3 蛋白檢測(cè)方法
        2.2.4 基礎(chǔ)培養(yǎng)基及流加培養(yǎng)基篩選實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 添加小分子促進(jìn)劑的流加培養(yǎng)
        2.2.6 CHO細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡測(cè)定
        2.2.7 CHO細(xì)胞培養(yǎng)過程中生化指標(biāo)測(cè)定
        2.2.8 攪拌式生物反應(yīng)器中CHO細(xì)胞培養(yǎng)工藝流程
        2.2.9 Western blot檢測(cè)
        2.2.10 融合蛋白生物活性檢測(cè)
        2.2.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 CHO細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)特性
        3.1.1 CHO細(xì)胞懸浮馴化培養(yǎng)
        3.1.2 無血清培養(yǎng)基篩選
        3.1.3 流加培養(yǎng)過程中CHO細(xì)胞生長、代謝及融合蛋白表達(dá)情況
    3.2 提高CHO細(xì)胞密度及延長細(xì)胞培養(yǎng)周期的培養(yǎng)基優(yōu)化
        3.2.1 小分子添加劑對(duì)CHO細(xì)胞生長及目的蛋白表達(dá)量的影響
        3.2.2 水解物添加濃度的確定
        3.2.3 流加培養(yǎng)過程中水解物對(duì)CHO細(xì)胞生長及目的蛋白表達(dá)的影響
        3.2.4 酵母提取物YE對(duì)培養(yǎng)基滲透壓影響
        3.2.5 酵母提取物YE對(duì)CHO細(xì)胞周期的影響
        3.2.6 酵母提取物YE對(duì)CHO細(xì)胞凋亡的影響
    3.3 攪拌式生物反應(yīng)器中CHO細(xì)胞培養(yǎng)工藝研究
        3.3.1 消泡劑添加濃度篩選
        3.3.2 通氣量和攪拌速率對(duì)CHO細(xì)胞生長的影響
        3.3.3 攪拌式生物反應(yīng)器流加培養(yǎng)過程中CHO細(xì)胞生長及代謝
        3.3.4 生物反應(yīng)器流加培養(yǎng)過程的優(yōu)化
        3.3.5 融合蛋白驗(yàn)證
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄: 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3046134