目的研究5-雜氮脫氧胞嘧啶核苷（5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR）能否誘導(dǎo)小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞HT22產(chǎn)生自噬對以及TSC1/mTOR通路是否參與其中。方法通過體外培養(yǎng)HT22細(xì)胞, 5-Aza-CdR孵育24 h后,采用MTS檢測對細(xì)胞活力的影響。采用RT-PCR和Western blot,檢測TSC1、mTOR和LC3的mRNA和蛋白表達(dá)水平;采用組織免疫熒光的方法檢測TSC1在不同組別HT22細(xì)胞中的表達(dá);通過轉(zhuǎn)染TSC1質(zhì)粒,檢測TSC1/mTOR途徑在自噬中的作用。結(jié)果 10μmol·L^-1 5-Aza-CdR可降低HT22細(xì)胞的活力,5-Aza-CdR使TSC1 mRNA和蛋白表達(dá)水平增加,p-mTOR （Ser2448）蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高;過表達(dá)TSC1后小鼠海馬HT22細(xì)胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高。結(jié)論 5-Aza-CdR可以誘導(dǎo)HT22自噬增加,可能是通過啟動TSC1/mTOR通路。 

【文章來源】：中國藥理學(xué)通報. 2020,36(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 試劑
    1.3 儀器
    1.4 細(xì)胞培養(yǎng)和分組
    1.5 5-Aza-CdR處理細(xì)胞
    1.6 MTS檢測細(xì)胞活力
    1.7 Real time RT-PCR
    1.8 Western blot
    1.9 免疫組織熒光染色
    1.10 質(zhì)粒構(gòu)建和DNA轉(zhuǎn)染
    1.11 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 5-Aza-CdR降低HT22細(xì)胞的活力
    2.2 5-Aza-CdR促進(jìn)TSC1 mRNA的表達(dá)
    2.3 5-Aza-CdR可增加TSC1蛋白的表達(dá),降低p-mTOR的表達(dá),增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例
    2.4 5-Aza-CdR增強(qiáng)小鼠海馬中TSC1蛋白的熒光強(qiáng)度
    2.5 過表達(dá)TSC1抑制p-mTOR,促進(jìn)LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例增加
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]橘紅素對人胃癌AGS細(xì)胞自噬的作用及其機(jī)制研究[J]. 陳圣敏,龔永昌,隋璐,楚敏,董楊.  中國藥理學(xué)通報. 2019(12)



本文編號：3041424