背景:miR-206/miR-613在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控OATP1B1的表達(dá)與功能;LncRNA HOTAIR可作用于miR-206/miR-613調(diào)節(jié)其靶基因表達(dá),引起對應(yīng)的功能改變;然而LncRNA HOTAIR對miR-206/miR-613調(diào)控OATP1B1是否起作用尚屬未知。目的:本文章旨在揭示LncRNA HOTAIR通過miR-206/miR-613對OATP1B1表達(dá)的調(diào)控作用及其分子機(jī)制,為闡明OATP1B1調(diào)控機(jī)制增添新的內(nèi)容,對臨床進(jìn)一步研究藥物反應(yīng)的個(gè)體差異提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。方法:1.在HepG2細(xì)胞中,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-206/miR-613 mimics及inhibitors,構(gòu)建miR-206/miR-613過表達(dá)和抑制表達(dá)細(xì)胞模型,采用RT-q PCR、WB技術(shù),研究miR-206/miR-613對OATP1B1 m RNA、蛋白表達(dá)的影響。2.在HepG2細(xì)胞中,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pc DNA3.1-HOTAIR、HOTAIR Smart Silencer和pc DNA3.1、HOTAIR Smart Silencer NC,構(gòu)建LncRNA HOTAIR過表達(dá)... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 miR-206/miR-613對OATP1B1 表達(dá)的影響
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 HepG2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors轉(zhuǎn)染
        2.2.4 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors轉(zhuǎn)染對HepG2 細(xì)胞中miR-206和miR-613 表達(dá)的影響
        2.2.5 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors轉(zhuǎn)染對HepG2細(xì)胞中OATP1B1 mRNA表達(dá)的影響
        2.2.6 miR-206/miR-613 mimics及 inhibitors轉(zhuǎn)染對HepG2細(xì)胞中OATP1B1 蛋白表達(dá)的影響
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 HepG2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)
        2.3.2 RNA完整性鑒定結(jié)果
        2.3.3 擴(kuò)增產(chǎn)物特異性
        2.3.4 HepG2 細(xì)胞蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.3.5 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-206/miR-613 mimics或 inhibitors對 HepG2 細(xì)胞miR-206/miR-613 表達(dá)的影響
        2.3.6 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-206/miR-613 mimics或 inhibitors對 HepG2 細(xì)胞OATP1B1 mRNA表達(dá)的影響
        2.3.7 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-206/miR-613 mimics或 inhibitors對 HepG2 細(xì)胞OATP1B1 蛋白表達(dá)的影響
    2.4 討論
第3章 LncRNA HOTAIR對 miR-206/miR-613及OATP1B1 表達(dá)的影響
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 主要溶液的配制
        3.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建、擴(kuò)增、提取及鑒定
        3.2.3 pcDNA3.1-HOTAIR及 LncRNA HOTAIR Smart Silencer轉(zhuǎn)染
        3.2.4 pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer轉(zhuǎn)染對miR-206/miR-613表達(dá)的影響
        3.2.5 pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer轉(zhuǎn)染對OATP1B1 mRNA表達(dá)的影響
        3.2.6 pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer轉(zhuǎn)染對OATP1B1 蛋白表達(dá)的影響
        3.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 擴(kuò)增引物特異性
        3.3.2 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer對 HOTAIR表達(dá)的影響
        3.3.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer對 miR-206/miR-613 表達(dá)的影響
        3.3.4 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer對OATP1B1 mRNA表達(dá)的影響
        3.3.5 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-HOTAIR及 HOTAIR Smart Silencer對OATP1B1 蛋白表達(dá)的影響
    3.4 討論
第4章 miR-206/miR-613對LncRNA HOTAIR調(diào)控OATP1B1 蛋白表達(dá)的影響
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)胞株和質(zhì)粒
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 主要工作液的配置
        4.2.2 HepG2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.3 LncRNA HOTAIR-miRNAs共轉(zhuǎn)染
        4.2.4 瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染LncRNA HOTAIR-miRNAs對 LncRNA HOTAIR表達(dá)的影響
        4.2.5 瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染LncRNA HOTAIR-miRNAs對 miR-206/miR-613 表達(dá)的影響
        4.2.6 瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染LncRNA HOTAIR-miRNAs對 OATP1B1 蛋白表達(dá)的影響
        4.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染LncRNA HOTAIR-miRNAs對 LncRNA HOTAIR表達(dá)的影響
        4.3.2 瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染LncRNA HOTAIR-miRNAs對 miR-206/miR-613 表達(dá)的影響
        4.3.3 瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染LncRNA HOTAIR-miRNAs對 OATP1B1 蛋白表達(dá)的影響
    4.4 討論
第5章 LncRNA HOTAIR特異性吸附miR-206/miR-613 調(diào)控OATP1B1 表達(dá)的機(jī)制研究
    5.1 材料
        5.1.1 細(xì)胞株及報(bào)告質(zhì)粒
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
    5.2 方法
        5.2.1 HEK-293T細(xì)胞的培養(yǎng)
        5.2.2 主要溶液的配制
        5.2.3 質(zhì)粒構(gòu)建、擴(kuò)增、提取及鑒定
        5.2.4 miR-206/miR-613 mimics對 LncRNA HOTAIR報(bào)告基因熒光素酶活性的影響
        5.2.5 LncRNA HOTAIR對 OATP1B1 報(bào)告基因熒光素酶活性的影響
        5.2.6 熒光素酶活性檢測
        5.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 miR-206/miR-613 mimics對 LncRNA HOTAIR報(bào)告基因熒光素酶活性的影響
        5.3.2 LncRNA HOTAIR對 OATP1B1 報(bào)告基因熒光素酶活性的影響
    5.4 討論
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-206/miR-613對OATP1B1基因和蛋白表達(dá)的影響及其機(jī)制研究[J]. 饒?jiān)?靳高鳳,劉名義,李新華,張紅,夏春華,熊玉卿.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2016(12)
[2]Analysis of long non-coding RNA expression profiles in gastric cancer[J]. Wei-Jun Cao,Hai-Lu Wu,Bang-Shun He,Yu-Shu Zhang,Zhen-Yu Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2013(23)



本文編號：3010640