探究miR-206/mi R-613對(duì)OATP1B1基因和蛋白表達(dá)的影響及其調(diào)控機(jī)制。通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)可靶向作用于OATP1B1 mRNA 3’-UTR的mi RNAs;采用RT-q PCR和Western blot等分子生物學(xué)方法檢測(cè)mi R-206/mi R-613、OATP1B1 mRNA及蛋白表達(dá)水平;采用雙熒光報(bào)告基因法,研究mi R-206/mi R-613作用于OATP1B1表達(dá)的確切機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),mi R-206/mi R-613種子序列與OATP1B1 mRNA 3’-UTR互補(bǔ)配對(duì),具有較高的特異性,且它們之間形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定。與對(duì)照組相比,過表達(dá)mi R-206/mi R-613,Hep G2細(xì)胞中OATP1B1的蛋白表達(dá)水平分別下調(diào)24.7%、38.8%,反之,抑制其表達(dá)OATP1B1的蛋白表達(dá)水平分別上調(diào)25%、38.2%,而OATP1B1 m RNA表達(dá)均未發(fā)現(xiàn)明顯改變;與對(duì)照組相比,過表達(dá)或抑制表達(dá)mi R-206/mi R-613,pMIR/OATP1B1-WT報(bào)告基因熒光素酶活性分別下降35%、30%或增加33.1%、32.5%,而在OA... 

【文章來源】：藥學(xué)學(xué)報(bào). 2016,51(12)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
材料與方法
    儀器與試劑
    生物信息學(xué)分析
    細(xì)胞培養(yǎng)
    寡核苷酸轉(zhuǎn)染
    RT-q PCR法檢測(cè)miR-206/miR-613及OATP1B1m RNA表達(dá)
    Western blot法檢測(cè)OATP1B1蛋白表達(dá)
    雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1生物信息學(xué)分析
    2瞬轉(zhuǎn)miR-206/miR-613擬似物或抑制物到HepG 2細(xì)胞對(duì)mi R-206/mi R-613表達(dá)的影響
    3 miR-206/miR-613對(duì)HepG 2細(xì)胞OATP1B1 mR NA表達(dá)的影響
    4 mi R-206/mi R-613對(duì)Hep G2細(xì)胞OATP1B1蛋白表達(dá)的影響
    5過表達(dá)或抑制mi R-206/mi R-613對(duì)報(bào)告基因熒光素酶活性的影響
討論



本文編號(hào)：3008420