炎癥是機(jī)體活組織對(duì)各種致炎因素的一種正常防御反應(yīng),而過(guò)度的炎癥反應(yīng)會(huì)誘發(fā)眾多疾病的發(fā)生,抗炎藥物的應(yīng)用在于抑制炎癥反應(yīng)的過(guò)度發(fā)生。非甾體抗炎藥是目前針對(duì)炎癥性疾病應(yīng)用較為廣泛的抗炎藥物,但供患者選擇的藥物種類(lèi)有限并存在個(gè)體差異,且長(zhǎng)期大劑量使用容易引起胃腸道副作用。因此需要探索發(fā)現(xiàn)更多更為有效、副作用小的新型抗炎藥物,從而為患者提供更多的用藥選擇,擴(kuò)大臨床用藥范圍。苯并噁唑類(lèi)化合物是目前新藥研發(fā)的重要領(lǐng)域之一,因其具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值而備受關(guān)注,目前已有多種此類(lèi)藥物用于臨床和科學(xué)研究。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)已建立的小分子篩選平臺(tái),篩選出4種具有生物活性的苯并噁唑類(lèi)衍生物,其中發(fā)現(xiàn)K313具有顯著的抗炎活性。目前尚未發(fā)現(xiàn)K313抗炎作用及機(jī)制研究的相關(guān)報(bào)道。因此,本課題將重點(diǎn)探索噁唑類(lèi)化合物K313的抗炎特性及其作用機(jī)制,為發(fā)現(xiàn)新的抗炎藥物奠定基礎(chǔ)。目的通過(guò)建立炎癥細(xì)胞模型,探討噁唑類(lèi)化合物K313的抗炎作用,以期發(fā)現(xiàn)新的具有顯著抗炎活性的先導(dǎo)化合物;通過(guò)初步探討K313的抗炎作用機(jī)制,揭示K313參與的抗炎信號(hào)通路以及可能作用的靶點(diǎn),為抗炎藥物靶點(diǎn)的選擇提供新思路。方法第一部分建立和優(yōu)化LPS... 

【文章來(lái)源】：成都醫(yī)學(xué)院四川省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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RAW264.7巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

圖 2 LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 巨噬細(xì)胞的最適時(shí)間Figure 2 The optimum time of LPS in RAW264.7 macrophages注：A：LPS（100 ng/mL）不同時(shí)間（0 h、1 h、3 h、6 h、24 h、48 h）作用于 RAW264.7 巨噬細(xì)胞，收集上清檢測(cè) NO 含量；B：NO 標(biāo)準(zhǔn)曲線。Note: A: LPS (100 ng/mL) was inculbated with RAW264.7 macrophages at different time (0 h, 1 h,3 h, 6 h, 24 h, 48 h), NO production in collected supernatant was determined by Griess Reagent; B:NO standard curve.3.3 LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生 NO 的最適濃度觀察體外 LPS 刺激 RAW264.7 巨噬細(xì)胞和人單核巨噬細(xì)胞 THP-1 細(xì)胞炎性模型產(chǎn)生 NO 情況，確定細(xì)胞模型中 LPS 最適刺激的濃度[23]。以不同濃度 LPS 刺激RAW264.7巨噬細(xì)胞和人單核巨噬細(xì)胞THP-1，檢測(cè)培養(yǎng)上清中炎性因子NO含量。結(jié)果顯示：LPS 誘導(dǎo) THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生低水平 NO，且誤差較大；而 LPS 誘導(dǎo)RAW264.7 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的 NO 含量與 LPS 的濃度呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系；當(dāng) LPS達(dá) 100 ng/mL 時(shí)，NO 產(chǎn)生量達(dá)平臺(tái)期。由此確定在細(xì)胞篩選模型中，已 RAW264.7

圖 3 LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 巨噬細(xì)胞和 THP-1 細(xì)胞炎性細(xì)胞模型Figure 3 LPS induced inflammation model of RAW264.7 and THP-1macrophages注：RAW264.7 巨噬細(xì)胞分別接種 2.5×105個(gè)/mL、5×105個(gè)/mL、1×106個(gè)/mL，不同濃度 LPS（0、5、10、20、50、100、500、1000 ng/mL）作用于相應(yīng)接種細(xì)胞，采用 Griess Reagent 方法檢測(cè)產(chǎn)生的 NO 含量。Note: RAW264.7 macrophages were inoculated with 2.5×105cells/mL, 5×105cells/mL, and 1×106cells/mL, respectively, and then incubated with different concentrations of LPS (0, 5, 10, 20, 50, 100,500, 1000 ng/mL), NO production in collected supernatant was determined by Griess Reagent.4 小 結(jié)本章對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞炎性模型的重要參數(shù)進(jìn)行了建立和優(yōu)化。確定采用 96 孔板，以 LPS（100 ng/mL）刺激 RAW264.7 巨噬細(xì)胞（5×105個(gè)/mL）作用 24-48 h 作為炎性模型的基本條件，該模型的建立和優(yōu)化為抗炎先導(dǎo)化合物的篩選和藥物作用機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of non-steroidal anti-inflammatory drugs on intestinal permeability and nonalcoholic fatty liver disease[J]. Erika Utzeri,Paolo Usai.  World Journal of Gastroenterology. 2017(22)
[2]Overview of cytokines and nitric oxide involvement in immuno-pathogenesis of inflammatory bowel diseases[J]. Imene Soufli,Ryma Toumi,Hayet Rafa,Chafia Touil-Boukoffa.  World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics. 2016(03)
[3]Non-steroidal anti-inflammatory drugs:What is the actual risk of liver damage?[J]. Fernando Bessone.  World Journal of Gastroenterology. 2010(45)



本文編號(hào)：3006630