癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病之一。和手術(shù)、化療、放療等傳統(tǒng)治療方法相比,新型治療手段發(fā)揮越來越重要的作用。其中,基因治療和光療以其安全低毒、高效可控的特點(diǎn),具有廣闊的應(yīng)用前景。研究表明,多種癌細(xì)胞內(nèi)均有高表達(dá)的miRNA-21,可以利用其抑制劑mi RNA-21i下調(diào)表達(dá),調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡信號通路,促進(jìn)凋亡,抑制增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。光動(dòng)力治療通過ROS能夠誘導(dǎo)凋亡,同時(shí)光熱治療提高腫瘤部位局部溫度,也會(huì)有效消融腫瘤。因此基因-光療的聯(lián)合,能夠更有效地殺傷腫瘤。為實(shí)現(xiàn)基因-光療的聯(lián)合,使藥物在溶酶體酸性環(huán)境下釋放并發(fā)揮作用,實(shí)現(xiàn)時(shí)空可控的精準(zhǔn)治療,本課題以納米氧化石墨烯為骨架,經(jīng)過逐層修飾,設(shè)計(jì)酸響應(yīng)型、具有電荷反轉(zhuǎn)功能化的多功能載體,同時(shí)負(fù)載ICG、mi RNA-21i,構(gòu)建共轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合物,實(shí)現(xiàn)藥物的同時(shí)運(yùn)輸、酸響應(yīng)性釋放、有序作用和時(shí)空可控的聯(lián)合治療。以納米氧化石墨烯為基底,將通過化學(xué)反應(yīng)藕聯(lián)多聚賴氨酸（PLL）,進(jìn)而與檸康酐（Cit）形成酰胺鍵,使納米載體帶負(fù)電,進(jìn)一步,通過靜電吸附作用樹狀大分子（PAMAM）,得到復(fù)合納米載體GO-PLL-Cit-PAMAM。利用Zeta電位、動(dòng)態(tài)光... 

【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 基因治療
        1.1.1 miRNA
        1.1.2 miRNA-21
        1.1.3 miRNA-21i
    1.2 腫瘤光療
        1.2.1 光動(dòng)力治療
        1.2.2 光熱治療
        1.2.3 光敏劑
        1.2.4 腫瘤聯(lián)合治療
    1.3 納米載體
        1.3.1 氧化石墨烯
        1.3.2 樹枝狀大分子
    1.4 酸響應(yīng)型納米復(fù)合物
    1.5 本課題的研究內(nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)
        1.5.1 研究內(nèi)容
        1.5.2 本論文的特色和創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 GPCP納米載體的構(gòu)建與表征
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 溶液配制
        2.2.3 儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 氧化石墨烯超聲預(yù)處理
        2.3.2 傅里葉變換紅外光譜表征
        2.3.3 GO-PLL的制備
        2.3.4 GO-PLL-Cit的制備
        2.3.5 GO-PLL-Cit-PAMAM的制備
        2.3.6 各物質(zhì)Zeta電位表征
        2.3.7 茚三酮法檢測GPCP中PAMAM的結(jié)合率
        2.3.8 動(dòng)態(tài)光散射分析
        2.3.9 原子力顯微鏡表征
        2.3.10 透射電鏡表征
        2.3.11 熱重分析
        2.3.12 酸響應(yīng)性電荷反轉(zhuǎn)性質(zhì)研究
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 GPCP的合成
        2.4.2 GPCP的結(jié)構(gòu)表征
        2.4.3 GPCP載體水力尺寸檢測
        2.4.4 GPCP納米載體的形貌表征
        2.4.5 熱重分析GPCP各組分的比例
        2.4.6 酸響應(yīng)性電荷反轉(zhuǎn)性質(zhì)研究
    2.5 本章小結(jié)
第三章 GPCP/miRNA-21i/ICG納米復(fù)合藥物的構(gòu)建與表征
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 溶液配制
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 GPCP/miRNA-21i的制備
        3.3.2 瓊脂糖凝膠電泳檢測miRNA-21i的吸附作用
        3.3.3 驗(yàn)證PAMAM對miRNA-21i的吸附作用
        3.3.4 肝素鈉釋放及DNaseI降解
        3.3.5 血清穩(wěn)定性檢測
        3.3.6 GPCP/ICG的制備
        3.3.7 GPCP/miRNA-21i/ICG的制備
        3.3.8 紫外-可見吸收光譜分析
        3.3.9 熒光光譜分析
        3.3.10 載藥率和包封率測定
        3.3.11 Zeta電位表征
        3.3.12 酸響應(yīng)性釋放
        3.3.13 光熱轉(zhuǎn)換能力研究
        3.3.14 單線態(tài)氧產(chǎn)率測定
        3.3.15 熒光成像
        3.3.16 光熱成像
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 GPCP/21i的合成和表征
        3.4.2 GPCP/ICG的制備及表征
        3.4.3 GPCP/21i/I的制備及表征
        3.4.4 酸響應(yīng)性釋放
        3.4.5 光熱轉(zhuǎn)換性能研究
        3.4.6 單線態(tài)氧產(chǎn)率測定
        3.4.7 體外成像研究
    3.5 本章小結(jié)
第四章 GPCP/21i/ICG體外基因-光療聯(lián)合抗腫瘤研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 溶液配制
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.2 生物安全性評估
        4.3.3 細(xì)胞內(nèi)吞分析
        4.3.4 亞細(xì)胞定位和溶酶體逃逸研究
        4.3.5 定量PCR實(shí)驗(yàn)
        4.3.6 免疫印跡試驗(yàn)（WesternBlot）
        4.3.7 細(xì)胞內(nèi)活性氧檢測
        4.3.8 光療效果
        4.3.9 光療-基因腫瘤聯(lián)合治療
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 納米載體的細(xì)胞毒性研究
        4.4.2 細(xì)胞內(nèi)吞
        4.4.3 亞細(xì)胞定位和溶酶體逃逸研究
        4.4.5 體外基因治療效應(yīng)研究
        4.4.6 體外光療抗癌效應(yīng)研究
        4.4.7 基因/光療聯(lián)合治療
    4.5 本章小結(jié)
第五章 GPCP/21i/ICG體內(nèi)基因-光療聯(lián)合抗腫瘤研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和動(dòng)物
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.3.2 構(gòu)建實(shí)體荷瘤裸鼠模型
        5.3.3 荷瘤裸鼠分組及給藥治療方案
        5.3.4 血常規(guī)及生化指標(biāo)檢測
        5.3.5 統(tǒng)計(jì)分析方法說明
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        5.4.1 荷瘤裸鼠熒光成像分析
        5.4.2 荷瘤裸鼠光熱成像分析
        5.4.3 裸鼠腫瘤及體重變化檢測
        5.4.4 血常規(guī)及生化指標(biāo)結(jié)果分析
    5.5 本章小結(jié)
第六章 全文總結(jié)與展望
    6.1 全文總結(jié)
    6.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
碩士期間取得的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]刺激響應(yīng)共負(fù)載藥物/基因微載體的制備[J]. 陳麗娜,王穎,朱瑩,孫一新,王幽香.  高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào). 2013(03)



本文編號：3004675