隨著基因重組技術(shù)和生物醫(yī)學(xué)工程的快速發(fā)展,抗體類藥物已成為生物治療的重要方案。因此,必須建立相關(guān)的質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)體系來保證終產(chǎn)品的穩(wěn)定性、安全性及有效性等,其中生物學(xué)活性測(cè)定是確�？贵w類藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。常見的針對(duì)抗體類藥物生物學(xué)活性測(cè)定分析的方法大多是基于體外的細(xì)胞檢測(cè),如細(xì)胞增殖抑制法、細(xì)胞毒性法、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性法（ADCC）等。如今新興的報(bào)告基因法不同于以上方法,其原理是基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)將報(bào)告基因?qū)爰?xì)胞,利用胞內(nèi)表達(dá)的特定產(chǎn)物來實(shí)現(xiàn)抗體類藥物生物學(xué)活性的檢測(cè)。第一個(gè)全人源化抗RANKL單抗藥Denosumab（商品名:Xgeva）已于2010年被FDA批準(zhǔn)上市,用于治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松。但其生物學(xué)活性測(cè)定采用的是均相時(shí)間分辨熒光（HTRF）法,此方法只能反映Denosumab的結(jié)合活性,不能反映出其真實(shí)的作用機(jī)制。近年來隨著國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展,抗RANKL單抗藥也不斷涌現(xiàn),相應(yīng)的生物學(xué)測(cè)定方法（RAW264.7酶活性測(cè)定法）也被開發(fā)出來,然而該方法存在著操作過程復(fù)雜、周期較長(zhǎng)（4-5天）、結(jié)果變異度高及細(xì)胞敏感性低等缺點(diǎn)。本研究旨在建立一種更為簡(jiǎn)捷穩(wěn)定的報(bào)... 

【文章來源】：中國(guó)食品藥品檢定研究院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

RANKL-RANK-NF-κB信號(hào)通路本次研究的實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)主要是構(gòu)建可以穩(wěn)定表達(dá)螢光素酶報(bào)告基因的細(xì)胞株，如圖2.1所示，通過此螢光素酶表達(dá)量的變化來間接反映抗體的效價(jià)

2.1 基于 RAW264.7 細(xì)胞的報(bào)告基因法檢測(cè)抗 RANKL 單抗生物學(xué)活性原理B 淋巴細(xì)胞刺激因子（B lymphocyte stimulator，BLyS）是近年來發(fā)現(xiàn)的壞死因子家族成員，主要由巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表達(dá)，并受多種因子的調(diào) IFN-γ、IL-6 等[42]。BLyS 在體內(nèi)主要以兩種形式存在：一種膜結(jié)合型，另是可溶型。膜結(jié)合型由 285 個(gè)氨基酸組成，分子量為 52kDa，其與相應(yīng)受體后可誘導(dǎo) B 淋巴細(xì)胞成熟分化并分泌 IgA、IgG 和 IgM 等免疫球蛋白；可溶

圖 3. 瞬轉(zhuǎn) pCA1.1-luc- NF-κB -Hygro 載體質(zhì)粒的 RAW264.7 細(xì)胞對(duì) sRANKL的反應(yīng)性sRANKL concentration (lg[ng/ml])

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2997911