目的探討重組脂連蛋白（APN）是否通過蛋白激酶C（PKC）及AMP活化蛋白激酶（AMPK）途徑在小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪/復(fù)氧（OGD/R）模型中發(fā)揮抗炎作用。方法 MA1800小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞分別采用氧糖剝奪（OGD） 2、 4、 6、 8、 12、 24 h及（20、 50、 100、 200、 400、 600、 800、 1000、 1200、 1600、 2000）μmol/L氯化鈷（CoCl₂）進(jìn)行OGD/R處理,采用Western blot法檢測PKC、 AMPK的磷酸化水平,確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)中OGD/R處理?xiàng)l件。將細(xì)胞分為正常對(duì)照組、 OGD/R處理組、單純APN處理組、 OGD/R聯(lián)合APN處理組、 AMPK抑制劑聯(lián)合OGD/R和APN處理組。采用Western blot法檢測PKCα、磷酸化的廣譜PKC[p-PKC （pan）]、 AMPKα、磷酸化的AMPKα（p-AMPKα）以及含pyrin結(jié)構(gòu)域NOD樣受體家族3（NLRP3）炎性體和細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平。結(jié)果在OGD處理6 h后復(fù)氧以及OGD處理中CoCl

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2020,36(07)北大核心

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Western blot法檢測MA1800細(xì)胞PKC和AMPK磷酸化水平

采用Western blot法檢測正常培養(yǎng)組、 OGD/R組、 單純APN組、 APN聯(lián)合OGD/R組MA1800星形膠質(zhì)細(xì)胞中AMPK、 PKC磷酸化水平。結(jié)果顯示, OGD/R組細(xì)胞中AMPK、 PKC的磷酸化水平顯著高于正常培養(yǎng)組(P<0.01, 圖2); 與OGD/R組相比, APN聯(lián)合OGD/R組細(xì)胞中PKC的磷酸化水平下降(P<0.05, 圖2), 但AMPK磷酸化無明顯變化, 提示APN可以抑制OGD/R引起的PKC磷酸化, 但不影響OGD/R引起的AMPK磷酸化。2.3 APN處理降低星形膠質(zhì)細(xì)胞NLRP3炎性體和細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中TNF-α水平

采用Western blot法檢測MA1800星形膠質(zhì)細(xì)胞中NLRP3炎性體的表達(dá), 以及細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中TNF-α的分泌水平。結(jié)果顯示, 與正常培養(yǎng)組相比, OGD/R組細(xì)胞的NLRP3水平及上清液中的TNF-α水平明顯上升(P<0.01, 圖3); 與OGD/R組相比, APN聯(lián)合OGD/R處理組細(xì)胞的NLRP3水平及上清液中的TNF-α水平均較低(P<0.05, 圖3), 提示APN對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)具有抑制效應(yīng)。2.4 AMPK不參與APN對(duì)PKC磷酸化及炎癥因子的抑制作用


本文編號(hào)：2982201